[发明专利]一种人PD-1蛋白胞外段亲和环肽C8及其应用

说明书

本发明具体涉及一种人PD‑1蛋白胞外段亲和环肽C8及其应用。该亲和环肽C8的氨基酸序列为Cys‑Lys‑Trp‑Tyr‑Arg‑Pro‑Ser‑Glu‑Cys，即C‑K‑W‑Y‑R‑P‑S‑E‑C，其中两个半胱氨酸C之间形成一个二硫键，将肽首尾链接成为环状，该环肽分子量为1169.35。该亲和环肽C8能够亲和PD‑1从而阻断PD‑1/PD‑L1之间的相互作用，进而起到抗肿瘤效果。本申请以rhPD‑1‑Fc为靶分子，筛选获得人PD‑1蛋白胞外段的亲和环肽C8。亲和环肽C8作用目标明确，对表达PD‑L1蛋白的肿瘤抑制效果明显，因而具有较好的医疗应用前景，为肿瘤免疫治疗提供了新的选择。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种人PD-1蛋白胞外段亲和环肽C8及其应用。

背景技术

肿瘤，尤其是恶性肿瘤是影响全球发病率和死亡率的主要原因之一，肿瘤的治疗方法有传统的手术切除、放射性治疗、化学药物治疗等，也有新兴的肿瘤免疫疗法。肿瘤免疫疗法是通过激发机体自身的免疫、改善自身免疫能力对肿瘤细胞进行杀伤，并且能够建立免疫记忆，阻止肿瘤的复发和转移，从而达到抗肿瘤效果。随着研究的深入，肿瘤免疫疗法获得越来越获多的关注，并于2013年被《科学》杂志评为十大科学突破之首。

在肿瘤免疫治疗中，CD8⁺T细胞是主要杀伤肿瘤的效应细胞，其激活过程需要通过MHC-I类分子介导的细胞免疫应答，激活过程中有两个信号，第一是识别信号，即肿瘤抗原等内源性抗原被树突状细胞（DC）等抗原递呈细胞（APC）加工处理以后以MHC/表位复合物的形式递呈至APC表面，该复合物被T细胞表面的T细胞受体（TCR）识别，进而激活T细胞识别抗原的第一信号；与此同时，APC表达的共刺激分子和T细胞表面的对应受体或配体相互作用，产生T细胞活化的第二信号。根据第二信号产生的效应不同，可将共刺激分子分为正性共刺激分子和负性共刺激分子，其中负性共刺激分子在肿瘤免疫治疗过程中能够引起CD8⁺T细胞等效应细胞耗竭或者失活，从而引起肿瘤的免疫耐受和逃逸，负性共刺激分子中研究较为深入的是细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）和程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）。

PD-1最早是在发生程序性死亡的细胞株中通过消减杂交的方法发现的，由288个氨基酸组成，相对分子质量是55,000 Da，是I型跨膜糖蛋白，其胞外区包含一个IgV样结构域，有4个重要的N连接糖基化位点，并被重度糖基化。PD-1主要表达于活化的T细胞、B细胞和髓系细胞表面。其公认的配体有PD-L1和PD-L2，由于PD-L2配体可能不仅仅是PD-1，因此，在抗肿瘤研究中主要把PD-L1作为PD-1的配体。PD-1/ PD-L1信号在肿瘤的发生过程中，可以产生抑制T淋巴细胞活性，发生免疫耐受、促进肿瘤免疫逃逸的作用。因此，通过阻断PD-1/PD-L1信号通路，可以有效激活机体T淋巴细胞活化，进而杀伤肿瘤细胞。

现有的研究已经表明PD-1/ PD-L1信号通路是CD8⁺T细胞活化过程中非常重要的负性调控通路，可以引起肿瘤免疫耐受和逃逸，因此，研究通过阻断PD-1/ PD-L1负性共刺激分子所介导的信号通路，打破肿瘤细胞的免疫耐受具有重要的理论意义和应用价值。

发明内容

本发明提供了一种人PD-1蛋白胞外段的亲和环肽C8，并经过实验证明了该亲和环肽C8具有抗肿瘤活性。

本发明采取的详细技术方案如下：

一种人PD-1蛋白胞外段的亲和环肽C8，该亲和环肽包含9个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体为：Cys-Lys-Trp-Tyr-Arg-Pro-Ser-Glu-Cys，即：C-K-W-Y-R-P-S-E-C，其中氨基酸序列中首尾两端的两个半胱氨酸C之间形成一个二硫键（S-S），将肽首尾链接成为环状，该环肽分子量为1169.35，亲和环肽C8结构式如下图所示。

所述人PD-1蛋白胞外段的亲和环肽C8在抗肿瘤免疫治疗或者制备抗肿瘤相关药物中的应用。