[发明专利]高效液相色谱技术测定维生素A的方法

说明书

本申请属于分析化学领域，具体涉及一种使用高效液相色谱技术检测维生素A的方法，本申请的技术方案为：C18液相色谱柱；流速为0.8‑1.0ml/min；柱温25‑35℃；检测波长325nm；进样量20μl；流动相A：5‑10mmol/L醋酸铵溶液‑甲醇体积比35‑40∶60‑65；流动相B：甲醇‑正丁醇体积比65‑70︰30‑35；采用梯度洗脱程序，本技术方案能够对维生素A中视黄醇、视黄醛和视黄酸进行定性和定量分析，其分离度好，检测限和定量限都较低，线性范围较宽符合定性定量的要求，从而能够准确的计算出三者的含量，为维生素A原料和制剂的进一步监测、研究提供了技术支持。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种使用高效液相色谱技术检测维生素A的方法。

背景技术

维生素A(vitaminA)又称视黄醇或抗干眼病因子，分子式：C₂₀H₃₀O是一个具有脂环的不饱和一元醇。维生素A有两种：一种是维生素A醇(retionl)，是最初的维生素A形态(只存在于动物性食物中)；另一种是胡萝卜素(carotene)，在体内转变为维生素A的预成物质(provitaminA)，可从植物性及动物性食物中摄取；前者多存于哺乳动物及咸水鱼的肝脏中，后者常存于淡水鱼的肝脏中，由于后者的活性比较低，所以通常所说的维生素A是指维生素A醇。维生素A醇即视黄醇，分子式：C₂₀H₃₀O，它极易被破坏，且对紫外线不稳定，很容易转化成视黄醛和视黄酸，所以在维生素A的原料、制剂以及产品中可能会存在视黄醛、视黄酸，导致维生素A产品纯度不高，所以其原料、制剂以及产品中质量受到影响。

视黄醛也称维生素A醛，分子式：C20H28O，是视黄醇氧化后的衍生物。视黄醛还原得到视黄醇，氧化得到视黄酸。视黄醛是视紫红质的辅基。视觉细胞内11-顺式视黄醛与视蛋白组成视色素，11-顺式视黄醛吸收光后异构为全反式视黄醛，使视紫红质构象发生变化，启动了对大脑的神经脉冲，从而形成视觉。

视黄酸分子式：C₂₀H₂₈O₂指的是视黄醇在细胞内转化而成的化学物质，与视黄醛共同作用，可以调控基因表达，减弱上皮细胞向鳞片状的分化，增加上皮生长因子受体的数量，它与和DNA连接及调节基因表达的受体结合以维持上皮组织和各种其他组织的导向分化。三者的结构式如下：

视黄醇

(2E,4E,6E,8E)-3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基环己基-1-烯基)-2,4,6,8-四烯壬醇

视黄醛

(2E,4E,6E,8E)-3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基环己基-1-烯基)-2,4,6,8-四烯壬醛

视黄酸

(2E,4E,6E,8E)-3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基环己基-1-烯基)-2,4,6,8-四烯壬酸

从以上结构可以看出，三者主链结构相同，只是末端官能团不同，所以想用同一方法对三种物质进行定性和定量分析时需要做进一步的研究，目前《中国药典2015年版二部》中的维生素A的标准全文中规定的维生素A系用每lg含270万单位以上的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，所以该药典中的检测方法是指对维生素A醋酸酯的检测，并不是对视黄醇的检测。