[发明专利]一种抗药抗体的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种抗药抗体的检测方法及检测试剂盒，其方法包括待测样品预处理和预处理样品检测，采用高密度富集磁珠对待测样品进行富集后对样品进行磁微粒化学发光免疫检测。通过高密度富集磁珠进行预处理，可以实现对样品中包括以药物‑ADA复合体形式存在的总ADA进行检测，得以克服样品中高浓度药物蛋白的影响，提高ADA检测方法的耐药性，同时也具有化学发光免疫检测方法的快速、自动化分析的优点。试剂盒包括高密度富集磁珠试剂、检测用磁珠试剂、标记发光基团的药物、样品稀释液、酸化液、中和液、质控品和激发液，采用试剂盒可以快速、准确检测抗药抗体。

技术领域

本发明涉及磁微粒化学发光免疫诊断领域，特别是涉及一种抗药抗体的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

自1982年首个重组蛋白类药物批准上市以来，目前国内外共有260多种治疗性重组蛋白类药物(包括70多种治疗性单抗药物)在临床上得到了广泛应用，用于230多种适应证的治疗(Nat Biotechnol,2014.32(10):p.992-1000；Health Aff(Millwood),2015.34(2):p.210-9)。随着对治疗性重组蛋白药物的研究越来越深入，对相关药物给药过程中产生的抗体即抗药抗体(Anti-Drug Antibody，ADA)的研究越来越受到重视(Immunol Today,1986.7(12):p.367-8.；Front Immunol,2016.7:p.21.)。抗药抗体的产生，会对治疗性重组蛋白类药物的安全性和有效性带来影响，因此ADA的检测是临床用药过程中需要密切关注的指标。此外，由于治疗性重组蛋白类药物的制剂形式和成分等会对蛋白质的免疫原性产生影响，因此，在药物开发过程中(包括临床前研究和临床试验阶段)，对ADA进行检测和评价已经成为药品监管部门的常规要求(FDA,Guidance for Industry:ImmunogenicityAssessment for Therapeutic Protein Products.2014.)。

重组蛋白类药物，由于与内源性蛋白氨基酸序列的差异、蛋白结构的改变及修饰、药物剂型、药物聚合、给药间隔和给药途径等因素，均可导致抗药抗体的产生；进而使药效下降甚至丧失、药物毒性增加、过敏反应与超敏反应发生、与内源蛋白产生交叉反应等，这些均造成潜在的药效损失和安全隐患。临床证据表明，患者体内抗药抗体的浓度在低至100ng/mL的水平时，就会具有临床意义上的影响，比如改变药代/药动、带来药物安全性隐患和降低药物治疗效果(AAPS J,2013.15(1):p.30-40.)。因此在ADA浓度达到100ng/mL前，就需要对患者体内的ADA进行有效测定，以供临床决策参考。

ADA在样品中会有两种存在形式，即游离ADA和ADA-药物结合复合物。此外，快速解离抗药抗体(如IgM)是免疫反应早期出现的抗体，各种ADA检测方法均需要评价对此类抗体的检测效果。如果不能检测到快速解离抗药抗体(如IgM)，则会低估真实阳性样品中的抗药抗体水平(FDA,Guidance for Industry:Assay Development and Validation forImmunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products.2016)。常规的桥接ELISA法通常只能检测血浆中的游离ADA。为了检测与药物结合的ADA，通常需要进行样品的前处理，采用包括酸化处理或高温孵育等的方法释放ADA。