[发明专利]一种人乳头瘤病毒的快速检测方法、液相芯片及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测人乳头瘤病毒的液相检测芯片、检测方法及检测试剂盒。液相检测芯片包括连接有可偶联基团的微球载体、可独立检测的标记分子、及针对不同HPV类型的核酸捕获探针，捕获探针含有一段特异性的核酸序列和至少一种可偶联的基团，特异性的核酸序列能够与不同类型HPV病毒编码的目标核酸分子形成一定程度的互补配对。本发明提供的方法能够实现微球载体的精准定量标记，显著提高对同一类微球载体标记的稳定性和可区分度。基于该芯片，本发明进一步提供了HPV检测方法及其试剂盒，能一次性检测24种常见的HPV类型，不仅能克服血清学和免疫组化方法的漏检缺陷，还大大提高了HPV的检测效率，实现对HPV病毒的早期检测。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种人乳头瘤病毒的快速检测方法、液相芯片及试剂盒。

背景技术

人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses，HPV)感染与人类多种肿瘤特别是宫颈癌的发生、发展密切有关。而宫颈癌为女性最常见的癌症之一，其发病率仅次于乳腺癌。全球每年新发病例约40万且有超过20万妇女死于该病。在发展中国家，由于宫颈癌筛查工作的不完善，其发生率是发达国家的6倍。近年，年轻宫颈癌患者有明显上升趋势，发病以每年2％～3％速度增长，对妇女的身心健康造成极大的危害。因此，对宫颈癌进行早期筛查的一项重要内容就是对HPV的检测。

HPV是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒。人类是HPV的唯一宿主，它定向感染人体皮肤及粘膜的复层鳞状上皮内，具有高度的宿主特异亲和力。

国际癌症研究中心(IARC)专题讨论会(1995年)明确提出，HPV感染是宫颈癌的主要病因。目前鉴定出HPV亚型100余种，其中30余种与宫颈感染和病变有关，根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种：将HPV6、11、40、42等归为低危型，主要引起生殖道、肛周皮肤和阴道下部的外生殖性湿疣类病变、扁平湿疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤变(CIN I)；高危型主要为HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82等，主要导致高度子宫颈上皮内瘤变(CIN II、CIN III)和宫颈癌的发生，尤其是HPV16和18型。因此，检测出样本中的具体HPV亚型对于宫颈癌的防治具有重要的指导意义。

HPV病毒无法在体外培养，在体内也不能被诱导出易于检测的免疫反应，因此无法采用血清学检测的方法对其进行诊断和分型。早期HPV的诊断主要是根据典型的临床表现和肉眼可见的尖锐湿疣，或是根据细胞学或病理学特征性改变来判断，包括巴氏涂片(PapSmear)和液基薄层细胞检测(TCT)，但常会出现一种未确定意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)，常可掩盖一部分有意义的组织病理学异常而出现假阴性结果，需结合分子生物学技术进行确诊。

荧光定量PCR(FQ-PCR)在常规PCR的基础上把基因扩增、分子杂交和光化学融为一体，使PCR扩增和产物分析的全过程在单管封闭条件下进行，实现了实时动态检测和结果自动化分析，从根本上解决了扩增产物污染和不能定量的问题。该方法通过探针杂交进一步提高了HPV DNA检测的特异性，具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点，适用于临床工作和大规模筛查。然而，目前该方法主要针对HPV6、11、16和18感染，易漏诊其他HPV亚型。同时，荧光定量PCR也不能实现对HPV进行精确分型，即不能明确HPV感染型别。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明的目的提供一种人乳头瘤病毒的快速检测方法、液相芯片及试剂盒，该芯片利用人工合成的、带有一定量可检测基团的标记分子，对同一类微粒载体进行定量标记，显著提高了标记载体的可区分度；基于此芯片，本发明的HPV试剂盒及检测方法能一次检测24种常见型别的HPV，大大提高了HPV的检测效率，实现对宫颈癌HPV病毒的早期检测，操作简单，具有高通量、高精度的优点。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种人乳头瘤病毒检测的液相芯片，主要包括有：