[发明专利]一种生产尼莫克汀的方法和菌株

说明书

本发明提供了一种高效率生产尼莫克汀的方法以及菌株，所述蓝灰链霉菌为抗L‑缬氨酸的蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus)。本发明在该蓝灰链霉菌发酵液中添加L‑缬氨酸可以节省菌体自身合成L‑缬氨酸所需的时间和营养，从而提高产量。

技术领域

本发明涉及一种微生物及其应用，尤其涉及一种可提高尼莫克汀发酵产量的菌株以及生产尼莫克汀的方法。

背景技术

尼莫克汀(Nemadectin)是一种十六元大环内酯类抗生素，属于米尔贝霉素族的一员，由蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus)经发酵产生，尼莫克汀经过半合成在其分子结构的C-23位引入＝N-OCH基团可以得到活性更强的抗生素莫西克汀(Moxidectin)。尼莫克汀的结构式为：

莫西克汀20世纪80年代中期以来开始作为动物用驱虫药使用，能够高效的杀灭线虫和体表寄生虫等，同时对动物有很好的安全性，是一种新型的广谱、高效、安全的大环内酯类驱虫抗生素，目前已被广泛用于兽医临床，市场需求日益增大。因此，能够高效率生产尼莫克汀的方法是所期望的。

发明内容

为了提高尼莫克汀的生产效率，本发明提供了一种高效率生产尼莫克汀的方法以及菌株。

本发明第一个方面是提供一种发酵生产尼莫克汀的蓝灰链霉菌株，所述蓝灰链霉菌为抗L-缬氨酸的蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus)。

本发明第二个方面是提供一种发酵生产尼莫克汀的方法，包括：含有蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus)的发酵液中，加入L-缬氨酸，进行发酵生产尼莫克汀；所述蓝灰链霉菌为抗L-缬氨酸的蓝灰链霉菌。

其中，所述菌株为所述蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseussp.Noncyanogenus)KS12-08，该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2017年2月15日，保藏编号CGMCC No.13661。

在一种优选实施例中，所加入的L-缬氨酸占发酵液重量比例优选为0.01％-0.1％，更优选为0.02％-0.08％，如：0.04％、0.05％、0.06％、0.07％。

在一种优选实施例中，所述蓝灰链霉菌发酵过程中，每天添加L-缬氨酸，每天添加的L-缬氨酸占发酵液重量比例优选为0.01％-0.1％，更优选为0.02％-0.08％，如：0.04％、0.05％、0.06％、0.07％。

在一种优选实施例中，蓝灰链霉菌在发酵液中完成初级代谢后加入L-缬氨酸。

在一种优选实施例中，所述发酵过程中，发酵温度优选为20-35℃，更优选为25-33℃，如28℃、30℃。

在一种优选实施例中，所述蓝灰链霉菌种子液接种至发酵培养基中，进行培养，获得所述发酵液。

在一种优选实施例中，以所述发酵培养基总重量为基准，所述发酵培养基包括：葡萄糖8％，麦芽糊精4％，黄豆饼粉2.8％，酵母粉0.5％，硫酸镁0.1％，硫酸锌0.01％，碳酸钙0.4％。

在一种优选实施例中，所述蓝灰链霉菌孢子接种于种子培养基获得种子液。

在一种优选实施例中，以所述种子培养基总重量为基准，所述种子培养基包括：麦芽糊精2.0％，葡萄糖1.0％，酵母粉1.0％，黄豆饼粉1.5％，硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.1％，碳酸钙0.2％。