[发明专利]一种生产尼莫克汀的方法

说明书

本发明提供了一种高效率生产尼莫克汀的方法，采用抗L‑缬氨酸的蓝灰链霉菌在L‑缬氨酸存在条件下进行发酵生产，解决了传统工艺里发酵中后期发酵产量增长缓慢的问题，延长了发酵周期，显著提高了尼莫克汀的发酵产率。

技术领域

本发明涉及一种微生物发酵方法，尤其涉及一种可提高尼莫克汀发酵产量的方法。

背景技术

尼莫克汀(Nemadectin)是一种十六元大环内酯类抗生素，属于米尔贝霉素族的一员，由蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseus sp.Noncyanogenus)经发酵产生，尼莫克汀经过半合成在其分子结构的C-23位引入＝N-OCH基团可以得到活性更强的抗生素莫西克汀(Moxidectin)。尼莫克汀的结构式为：

莫西克汀20世纪80年代中期以来开始作为动物用驱虫药使用，能够高效的杀灭线虫和体表寄生虫等，同时对动物有很好的安全性，是一种新型的广谱、高效、安全的大环内酯类驱虫抗生素，目前已被广泛用于兽医临床，市场需求日益增大。因此，能够高效率生产尼莫克汀的方法是所期望的。

发明内容

为了提高尼莫克汀的生产效率，本发明提供了一种高效率生产尼莫克汀的方法。

本发明所提供的生产尼莫克汀的方法，包括：含有蓝灰链霉菌(Streptomycescyaneogriseus sp.Noncyanogenus)的发酵液中，加入L-缬氨酸，进行发酵。其中，所述蓝灰链霉菌为抗L-缬氨酸的蓝灰链霉菌；在发酵过程中，控制发酵液中蓝灰链霉菌生长因子质量浓度维持在0.1％-8％。

在一种优选实施例中，所述蓝灰链霉菌(Streptomyces cyaneogriseussp.Noncyanogenus)KS12-08，该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2017年2月15日，保藏编号CGMCC No.13661。

在一种优选实施例中，所加入的L-缬氨酸占发酵液重量比例优选为0.01％-0.1％，更优选为0.02％-0.08％，如：0.04％、0.05％、0.06％、0.07％。

在一种优选实施例中，所述蓝灰链霉菌发酵过程中，每天添加L-缬氨酸，每天添加的L-缬氨酸占发酵液重量比例优选为0.01％-0.1％，更优选为0.02％-0.08％，如：0.04％、0.05％、0.06％、0.07％。

在一种优选实施例中，蓝灰链霉菌在发酵液中完成初级代谢后加入L-缬氨酸。

在一种优选实施例中，至少在加入L-缬氨酸之后的发酵过程中，控制发酵液中蓝灰链霉菌生长因子质量浓度维持在0.2％-6％，更优选为0.4％-4％，更优选为0.5％-2％，更优选为0.7％-1.5％，如1％、1.2％。

在一种优选实施例中，所述发酵过程中，当蓝灰链霉菌生长因子质量浓度低于1.5％时，进行补加蓝灰链霉菌生长因子。

其中，所述蓝灰链霉菌生长因子优选为单糖、双糖、或寡糖中的一种或几种。其中，所述单糖可以是优选为苏力糖、木糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖中的一种或几种；所述双糖可以是优选为蔗糖、麦芽糖、异麦芽糖、乳糖、海藻糖中的一种或几种；所述寡糖优选为低聚果糖、低聚木糖、低聚麦芽糖、低聚异麦芽糖中的任意一种或几种。

在一种优选实施例中，所述发酵过程中，发酵温度优选为20-35℃，更优选为25-33℃，如28℃、30℃。

在一种优选实施例中，所述蓝灰链霉菌种子液接种至发酵培养基中，进行培养，获得所述发酵液。

在一种优选实施例中，以所述发酵培养基总重量为基准，所述发酵培养基包括：葡萄糖8％，麦芽糊精4％，黄豆饼粉2.8％，酵母粉0.5％，硫酸镁0.1％，硫酸锌0.01％，碳酸钙0.4％。