[发明专利]白细胞介素-6的编码基因及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种白细胞介素‑6的编码基因。所述编码基因为(a)‑(c)中任一种或多种:(a)由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；(b)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的核苷酸序列；(c)在严格条件下与(a)或(b)限定的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的核苷酸序列。本发明通过优化IL‑6的编码基因，解决了天然IL‑6基因序列中局部GC含量过高而出现发卡结构的问题，同时降低了因天然IL‑6基因序列中局部AT含量过高而导致的转录提前终止的可能性，并且所有氨基酸的密码子均为大肠杆菌系统中有利于高水平表达的高频密码子，提高了IL‑6原核表达量。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及白细胞介素-6的编码基因及其制备方法和应用。

背景技术

白细胞介素-6，简称IL-6，一种分子量约为26kD的糖蛋白，其蛋白质前体由212个氨基酸残基组成，其中27个氨基酸是其前导肽。成熟IL-6蛋白由185个氨基酸残基组成，未经糖基化修饰的蛋白分子量约为20kDa。

IL-6及其受体与炎症性疾病有关，它是多功能炎性细胞因子，是炎性介质网络的关键成份，在炎症反应中起重要作用。IL-6与多种肿瘤发生、发展关系密切，它通过干预细胞的黏附性和活动力、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增殖，从而影响肿瘤的进展。IL-6的脐带血是早产儿预测早发性败血症最显著变量，而IL-6在母体血液是表示宫内环境，故可用于识别怀孕。体内IL-6的水平上升，可以导致多种疾病如:甲状腺疾病、免疫异常性疾病、脓毒血症、肾小球肾炎的肾小球增殖，克罗恩病(CD)和Castleman氏病等。

随着对IL-6作用机制及临床应用研究的不断深入，IL-6作为抗原和药物筛选的重要标记，其需求量也大大增加。目前，市场上主要利用大肠杆菌进行表达，由于天然IL-6DNA序列存在较多的大肠杆菌稀有密码子和二硫键等原因，表达量较低，且存在发卡结构和转录提前终止等现象。

发明内容

本发明目的在于提供一种白细胞介素-6的编码基因，该编码基因解决了天然IL-6基因序列中局部GC含量过高而出现发卡结构的问题，同时降低了因局部AT含量过高而导致的转录提前终止的可能性，并且所有氨基酸的密码子均为大肠杆菌系统中有利于高水平表达的高频密码子。

本发明提供了一种白细胞介素-6的编码基因，所述编码基因为(a)-(c)中任一种或多种:

(a)由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

(b)与SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的核苷酸序列；

(c)在严格条件下与(a)或(b)限定的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的核苷酸序列。

优选情况下，所述严格条件为0.2×SSC，0.1％SDS，60℃杂交。

本发明还提供了含有上述编码基因的重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。

优选情况下，所述表达载体为pET-30a(+)。

优选情况下，所述重组菌为将权利要求1所述编码基因插入表达载体得到的重组菌。

本发明还提供了上述编码基因或上述的重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒在制备IL-6蛋白中的应用。

本发明还提供了一种白细胞介素-6的制备方法，包括以下步骤：