[发明专利]一种衰退菌种返自然环境的复壮培养方法

说明书

本发明公开了一种衰退菌种返自然环境的复壮培养方法，其包括以下几个步骤：①菌种的活化；②衰退菌种返自然环境复壮；③复壮菌种扩繁。其中，复壮方法是在自然条件下完成。不仅排除自然环境中的非目标微生物对目标纯培养物的污染，还可以使多次传代培养的纯培养物中已经发生衰退的个体由于不能适应原有自然条件而被清除，从而令复壮期完成时装置内仅存活能适应该条件的个体，完成特定衰退菌种的复壮，也无人为因素的干扰。本发明的优点是可实现衰退菌种简单、有效地复壮。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术，特别是一种衰退菌种返自然环境的复壮培养方法。

背景技术

在微生物的基础研究和应用领域中，选育一个理想菌株是一件艰苦的工作，而要保持菌株的遗传稳定性更是困难。长期的应用，反复的细胞分裂增殖传代，菌种的退化无法避免，此常引起菌株性能衰退导致生产效益下降或者特定研究结果偏离实际。

目前，常用于衰退菌种复壮的方法主要有：

（1）纯种分离：采用平板划线或稀释涂布平板法，把仍保持原有典型优良性状的单细胞分离出来，经扩大培养恢复原有菌株的典型优良性状。

（2）通过寄主体内生长进行复壮：主要是一些寄生性的菌株，可以将衰退的菌株接种到相应的宿主体内，提高其寄生性能及其他性能。

（3）采用比较激烈的理化因素进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体从而留下群体中生长健壮的个体。

（4）采用有效的菌种保藏方法。

上述的微生物衰退菌种复壮方法是在实验室条件下反复划线根据相关生理指标逐一进行分离或通过反复接原宿主再根据相关生理指标逐一分离，耗时、费工，效率低下。

发明内容

鉴于上述问题，本发明的目的在于提供一种衰退菌种返自然环境的复壮培养方法，该方法可用于衰退菌种在自然界条件下的复壮，能够有效解决菌种衰退的问题。

为了实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：

一种衰退菌种返自然环境的复壮培养方法，包括如下步骤：

（1）菌种活化：配制培养基，灭菌，冷却，在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已解冻的菌种保藏管中吸取一定量的菌液，滴入培养基中，将接种好的培养基置于设定温度的摇床，按设定的转数培养至对数期；

（2）衰退菌种返自然环境复壮：

1）在超净工作台上，准备分析自然条件下特定种类微生物间相互作用的装置，取2层圆形微孔滤膜置于装置反应器主体的宽平缘凹面上，使微孔滤膜将橡胶密封圈完全覆盖；

2）将步骤（1）待复壮的特定种类微生物的适量菌泥或菌液置于微孔滤膜中央；

3）另取2层微孔滤膜，将步骤2）的菌泥或菌液夹在4层微孔滤膜中间；

4）将反应器置于自然界环境中，使其在自然条件下复壮；

（3）复壮菌种的扩繁：

1）当复壮过程结束后，将反应器取出打开，将接触外界环境的2层滤腊弃去，将中间夹有菌泥或菌液的2层内膜置于灭菌的取膜器底座中央，并通过固定器将膜边缘完全压紧；

2）按下手柄，通过刀刃将膜未接触外界环境微生物的部分切下，置于无菌生理盐水中冲洗；

3）将生理盐水菌悬液稀释后涂布于目标固体培养基上，倒置，适温培养至长出菌落，从而得到返自然环境复壮的菌株。

步骤（1）所述的菌种为衰退的菌种。

步骤（1）所述的菌种活化所用的培养基为菌种生长所需的固体培养基或液体培养基。