[发明专利]丹参酮ⅡA干预的间充质干细胞移植抗阿尔茨海默病神经炎症的应用

说明书

本发明涉及丹参酮ⅡA干预的间充质干细胞移植抗阿尔茨海默病神经炎症的应用；首先分离培养MSC，并应用浓度6～12μM的丹参酮IIA干预MSC 48～84 h；通过动物模型验证丹参酮ⅡA干预的MSC移植抗阿尔茨海默病神经炎症的效果。采用Aβ_25‑35大鼠侧脑室注射法建立AD大鼠模型，将足量的上述丹参酮ⅡA处理过的MSC定位定量接种于AD模型大鼠的海马部位，应用Morris水迷宫对AD模型大鼠进行学习记忆能力评价；取脑、血清等组织，测定免疫器官指数、氧化/抗氧化相关指标、细胞凋亡，并检测神经损伤与再生相关基因和蛋白的表达；结果表明丹参酮ⅡA干预的MSC移植具有明显的抗阿尔茨海默病神经炎症的作用。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，特别涉及使用丹参酮ⅡA干预的间充质干细胞移植抗阿尔茨海默病神经炎症的应用。

背景技术

中国国家统计局《2016年国民经济和社会发展统计公报》数据显示，中国13.82亿人口中，60岁及以上的老人2.3亿人，占总人口比例为16.7%；65岁及以上人口数为1.5亿人，占比10.8%，中国已经成为世界上老龄化最严重的国家。伴随着老龄化社会的到来，以阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）和帕金森病为主的神经退行性疾病的发病率也逐年上升。由于神经退行性疾病能够严重影响患者的生活自理能力，不仅会给社会和家庭带来沉重的经济负担，还将严重降低患者晚年的生活质量。因此对神经退行性疾病的防治具有重要的现实意义。

AD是以老年斑（senile plaque，SP）和神经纤维缠结（neurofibril tangle，NFT）为主要病理特征的神经退行性疾病。研究表明错误折叠和沉淀的蛋白与小胶质细胞模式识别受体的结合，是神经炎症异常激活的重要因素，而异常激活的神经炎症反应是AD进行性加重和发展的重要原因。早在1982年，炎症相关蛋白、补体因子和免疫球蛋白就已经在AD患者的老年斑中被发现。此后，进一步研究发现，在老年斑周围有大量被激活的小胶质细胞聚集，并且小胶质细胞异常激活引起的神经炎症促进tau蛋白形成神经纤维缠结。可溶性β-淀粉样蛋白（amyloid β，Aβ）可通过胞外蛋白酶解系统降解，但引起AD最主要的纤维状Aβ却是由小胶质细胞清除的，小胶质细胞可以通过相关受体识别Aβ从而被激活，主要包括白细胞分化抗原36（cluster of differentiation 36，CD36）、CD14、CD47、α6β1整合素，和TLRs（2、4、6和9）。激活的小胶质释放大量的细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β等）、NO和补体相关蛋白等，最初急性的炎症反应有助于清除Aβ和恢复内环境稳定，但持续的细胞因子浸润和免疫应答引起慢性神经炎症反应，负反馈调节使得Aβ吞噬受体表达下调，最终导致小胶质细胞吞噬能力不足，使Aβ进一步沉积，形成恶性循环，最终导致神经元结构和功能改变。此外，这些促炎细胞因子可能通过相关信号通路的传导，使NF-κB、p38 MAPK和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）等表达上调，从而诱导神经元变性凋亡。这些细胞因子几乎参与了神经炎症的整个过程，并且是AD病人进行性功能丧失的重要原因。

间充质干细胞(MSC，mesenchymal stem cells)是最初在骨髓发现的，一种发源于中胚层的多功能干细胞，在特定的环境刺激下，具有分化成特定成熟细胞（神经、骨、心肌等细胞）的能力，是再生医学中用于修复的理想种子细胞。而MSC最引人注意的是其很强的免疫调节能力，在人体不同的炎症情况下，表现出惊人的调节能力。在炎症较弱的情况下，它可以促进免疫反应；而在炎症反应很强时，它可以抑制免疫反应，最终使体内的炎症免疫反应维持在一个合理的范围之内。除此之外，有研究者发现MSC拥有其他干细胞所没有的优点，在干细胞中只有它还有向损伤组织定向迁移的能力。正是这种可塑性和向损伤组织定向迁移的能力，使得MSC在抗阿尔茨海默病神经炎症中表现出良好的应用前景。

但是MSC的临床应用依然面临着很多的问题和挑战：由于MSC的数量不够，所以需要经过体外扩增后才能满足临床的大量需要；而经过扩增的MSC其干性往往会比初代的MSC低，出现老化，根据环境分化成具体成熟细胞的能力降低。