[发明专利]一种心肌肥厚基因鉴别诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种心肌肥厚基因鉴别诊断试剂盒，其特征在于：该技术涉及一种应用大规模平行测序平台NGS技术检测心肌肥厚基因鉴别诊断试剂盒。本发明的主要特征在于：A.独特设计并制备捕获探针，针对基因ACTC1、ACTN2、ANKRD1、CALR3、CASQ2、CAV3、CSRP3、FHL1、JPH2、LDB3、MYBPC3、MYH6、MYH7、MYL2、MYL3、MYLK2、MYOZ2、MYPN、NEXN、PLN、PRKAG2、SLC25A4、TCAP、TNNC1、TNNI3、TNNT2、TPM1、TRIM63、TTN、VCL、GLA、TTR、LAMP2、FLNC全部外显子片段；B.设计独特带有标签序列的接头；C.通用引物对探针序列进行PCR扩增；D.设计独特的混合后目的片段的捕获操作。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学诊断和生物技术，涉及一种心肌肥厚基因突变的体外诊断试剂盒，是一种应用于新一代测序平台NGS技术的一种心肌肥厚基因鉴别诊断试剂盒。

背景技术

心肌肥厚(Myocardial hypertrophy，MH)是多种心血管疾病的共同的病理过程，如心脏瓣膜病、心肌病、高血压等，它是心肌组织为了应付心脏负荷增加所做的一种代偿性反应，在MH的过程中，心肌细胞的蛋白质合成增加、体积增大、心肌细胞纤维化及间质成分增加，是心血管疾病发病的独立危险因素之一。MH可分为病理性肥厚与生理性肥厚，生理性肥厚是指妊娠、体育锻炼等所致的心肌肥厚，但这种类型通常是可逆的；病理性肥厚是指存在心肌病、冠心病、高血压以及结构性心脏病(如心脏瓣膜病)等疾病时，心脏对长期容量负荷过度或压力所出现的心肌肥厚代偿反应，这种肥厚多不可逆。长期的病理性心肌肥厚可引起心脏收缩和舒张功能不全，最终导致心衰、心律失常、心肌缺血甚至猝死等风险。心肌肥厚的病理表现主要为：心肌细胞肥大、与无序的核相互卷曲，心肌结构紊乱，局限性或弥散性的间质纤维化，胶原骨架增厚以及无序，心肌内可出现小血管壁增厚等。心肌肥厚临床常见，病情进展存在的风险较大，因此了解心肌肥厚的发病机制和对致病因素的确诊对患者的病情有着至关重要的作用。

目前，Sanger测序作为传统的测序技术，一次反应只能对一段碱基序列进行测定，虽然精准但是效率低，单核苷酸测序成本高。而针对具有遗传异质性的复杂疾病的研究，通常需要对数个甚至数十个基因的全部编码区域进行测序以寻找有价值的突变信息，Sanger测序法不能满足测序的要求。

近年，大规模DNA平行测序平台(massively parallel DNA sequencingplatform)已经发展为主流的基因测序技术，这项测序技术的出现不仅令DNA测序费用降到了以前的百分之一、千分之一，而且检测的稳定性和准确性已经大大提高，目前市场上的主要技术平台已经能够达到99.99％的准确性。特别是这项技术的高通量特性，使得以前花费半年或者一年以上时间进行的复杂遗传疾病的基因检测成为可能。本发明可以同时检测几十个甚至上百个病人的检测，非常使用于地区性的检测中心使用。

目前NGS技术将广泛应用，使研究人员对疾病与遗传物质关系的研究达到了新的高度。NGS技术诊断的优势在于：

1)方便，安全，快捷：仅抽取2-4毫升血；

2)任何时间都可以检查；

3)不限制饮食，服药，任何身体状况都可以检测；

4)相比反复，多项传统检查，更为经济；

5)发病前，疾病极早期诊断的唯一方式；

6)源头确诊，一次检测，终身受益

本发明是在现有的NGS技术之上，通过自主设计捕获全部目的基因的探针，并对探针和反应体系的不断优化，不仅可以一次性检测全部心肌肥厚的致病基因，更提高了检测的准确度，并极大的降低了测序的成本，使之广泛用于临床成为可能。

发明内容