[发明专利]一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法

说明书

本发明属于扩增程序技术领域，公开了一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；预变性：94℃，2分钟，1次循环；变性：94℃，10秒，40次循环；退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环；仪器冷却：35℃，10秒，1次循环。从2009年至今，本发明一直采取此方式进行扩增人乳头瘤病毒(HPV16/18型)，该项目每年均参加了卫生部的室间质评(每年2次)，比对通过率为100％；节约了成本并提高了效率。

技术领域

本发明属于扩增程序技术领域，尤其涉及一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

人乳头瘤病毒(HPV16/18型)定性和HBV DNA定量为科室每天必扩增的项目。扩增时，在罗氏扩增仪(Light Cycler 480)需要各自加样于一块96孔板并且按照其本身的说明书程序进行扩增。但是仪器数量有限，两个板分别扩增也比较耗时，影响了科室的出单效率。

HPV的检测在宫颈癌的早期筛查中扮演着重要的角色，很大程度上提升了宫颈癌和癌前病变的检出率。HPV的检测方法最初是基于细胞学检查所见，随着人们对HPV和宫颈病变关系的深入了解，HPV-DNA/RNA检测在宫颈病变预防、筛查、诊治及随访中的作用日益显现，优于传统的细胞学检查。

目前科学家已证明了感染HPV病毒是引起宫颈癌的主要病因，高危-HPV检测捕获早期宫颈癌是近几年医学界刚刚发明并开展起来的一种快速、有效的检测方法，可一次检测所有引致宫颈癌的13个高危型HPV病毒，使宫颈癌检出率达99％以上。这种方法都简便易行、无创伤、无痛苦。定期接受高危-HPV病毒检测，可以及早发现有无HPV病毒感染，及早治疗。

HPV的检查还可以取病变组织和局部组织粘液、分泌物进行HPV-DNA检测。PCR技术具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时，对待检原始材料质量要求低等特点。目前认为PCR技术是检测HPV DNA及分型的最好方法，是当今用于HPV感染诊断最常用的方法。

在PCR扩增过程中，特异性引物和探针分别与靶系列结合，Taq酶在引物的引导下复制靶系列当遇到结合在两条引物之间的探针时，发挥5′端外切酶功能，将探针水解，水解下来的FAM荧光基团受激发发射荧光，每合成一条DNA链发射一次荧光信号。因此只要标本中含相应类型的HPV病毒就会有荧光信号的积累，从而达到检测HPV DNA的目的。

综上所述，现有技术存在的问题是：

现有人乳头瘤病毒定性扩增程序成本高，扩增比较耗时，影响了科室的出单效率。

解决上述技术问题的难度和意义：

本发明更改了人乳头瘤病毒(HPV16/18型)的扩增程序并进行验证，可以将人乳头瘤病毒(HPV16/18型)和HBV DNA同时加于一块板，用该程序扩增。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法。

本发明是这样实现的，一种人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法，所述人乳头瘤病毒定性扩增程序的扩增方法包括：

UNG酶反应：50℃，2分钟，1次循环；

预变性：94℃，2分钟，1次循环；

变性：94℃，10秒，40次循环；

退火、延伸及检测荧光：60℃，30秒，40次循环。

进一步，退火、延伸及检测荧光后，还需进行：

仪器冷却：35℃，10秒，1次循环。