[发明专利]一种用化学发光检测食品安全的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体是一种用化学发光检测食品安全中恶唑菌酮残留的试剂盒及其制备方法。

背景技术

恶唑菌酮，外文名Famoxadone，化学式是C22H18N2O4。恶唑菌酮是新型高效、广谱杀菌农药。适宜作物如小麦、大麦、豌豆、甜菜、油菜、葡萄、马铃薯、爪类、辣椒，番茄等。主要用于防治子囊菌纲、担子菌纲、卵菌亚纲中的重要病害如白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病、晚疫病等。与氟硅唑混用对防治小麦颍枯病、网斑病、白粉病、锈病效果更好，具有保护、治疗、铲除、渗透、内吸活性。作用机制是能量抑制剂，即线粒体电子传递抑制制。具有亲脂性，喷施作物叶片上后，易粘附，不被雨水冲刷特效。但是，食品中恶唑菌酮农药残留的最大残留限量各国均是有明确相关规定的，用于保障食品安全。土壤中的恶唑菌酮残留量的测定也有有益效果。

目前恶唑菌酮检测的方法有：微生物法、酶联免疫法、高效液相色谱法、胶体金法、化学发光法。微生物法特异性差，操作繁琐，检测周期较长，且结果误差较大。采用酶联免疫法进行检测的缺点是过氧化酶或碱性磷酸标记物易失活，显色底物见光易分解，灵敏度低，对结构类似的化合物具有一定的交叉反应，造成测试结果不准确，并且只适用于微量物质的检测和鉴定。采用高效液相色谱法的缺点为样品前处理复杂，费力费时，检测成本高。采用胶体金法进行检测的缺点是最后检测结果是以肉眼可见的颜色进行表征，误差较大，并且操作繁琐，流程较多，更易出现误差，灵敏度低。本发明采用吖啶酯标记，具有如下优点：1背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；2闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；3吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，提高系统整体灵敏度；4易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少； 5标记物稳定，不受环境氧化剂的影响，在2-8℃下可保存数月之久。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

发明内容

本发明提供了一种具有较高灵敏度和特异性的检测食品中恶唑菌酮农药残留的试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用化学发光检测食品安全的试剂盒及其制备方法，本发明所提供的化学发光法检测恶唑菌酮农药残留的试剂盒，可以采用恶唑菌酮抗体偶联磁微粒，吖啶酯标记恶唑菌酮，也可以采用恶唑菌酮抗原偶联磁微粒，吖啶酯标记恶唑菌酮抗体。试剂盒还包括恶唑菌酮校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液；其中所述恶唑菌酮抗原为人工合成多肽抗原，其氨基酸序列为Glu Lys Lys Gly Ile Gln Gly Ser Thr Ala Lys Ser。。

作为优选，所述化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE、NSP-SA-NHS等。

作为优选，所述的吖啶酯标记的是恶唑菌酮抗原或恶唑菌酮抗体。

作为优选，所述吖啶酯标记恶唑菌酮抗原或抗体的标记缓冲液为ph 9.0-11.0、浓度为0.1mol/L的碳酸钠-碳酸氢铵，优选ph为10.0。

作为优选，所述的吖啶酯与抗原或抗体的摩尔比为5-100:1，优选摩尔比为 7.4:1。

作为优选，所述的吖啶酯溶于DMSO或DMF中，且所配制溶液的最终浓度为 0.1-100mmol/L，优选浓度为5.5mmol/L。

作为优选，所述的磁微粒可直接与恶唑菌酮抗体或抗原偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记恶唑菌酮抗体或抗原。

作为优选，所述磁珠的表面修饰基团为羧基、氨基、链霉亲和素-生物素或对甲苯磺酰基。磁珠使用前固相的不完全沉降会英雄精确度，因此选择时应选分散性好，长时间放置磁珠抱团个数少，沉降速度慢的磁珠。

作为优选，所述的校准品是用含有0.5-5.0％牛血清白蛋白和0.1-0.5％PC300 的氨丁三醇缓冲液为基质，加入恶唑菌酮纯品配制而成，校准品形态为液态。

作为优选，所述的恶唑菌酮校准品溶液浓度分别为：0μg/L、0.4μg/L、2 μg/L、10μg/L、50μg/L、250μg/L。

作为优选，本发明所述的化学发光预激发液A为双氧水和硝酸的混合液，其中双氧水质量分数为0.05-5％，硝酸浓度为0.05-2.5mol/L。

作为优选，本发明所述的化学发光预激发液B为聚乙二醇辛基苯甲醚和氢氧化钠的混合液，其中聚乙二醇辛基苯甲醚的浓度为0.05-2.0mol/L，氢氧化钠的浓度为0.05-1.0mol/L。