[发明专利]一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用

说明书

本发明提供一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用，细胞生长因子冻干粉是由脐带间充质干细胞传代培养的细胞培养上清液进行冰冻后制备而成，并加入人血白蛋白作为保护剂。制备方法包括以下步骤：A:将脐带间充质干细胞进行分离;B:将脐带间充质干细胞加入培养基中进行传代培养;C:收集步骤B中脐带间充质干细胞培养上清液，加入甘露醇与人血白蛋白后先将细胞培养上清液抽至离心管中放置低温冰箱或者液氮罐中冻存至固态状，使培养基完全冰冻结实，将固态状的冰冻培养基放置冻存瓶中，然后上机冷冻干燥12‑24h制成冻干粉，并冷藏保存。加入人血白蛋白作为保护剂，不易引起过敏及其他排斥反应，更易吸收，对皮肤有抗氧化的功效，进一步延缓皮肤衰老。

技术领域：

本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用。

背景技术：

MSC是目前研究最多的干细胞，目前许多临床试验以证实MSC能够治疗多种疾病，并且具有较好效果，细胞生长因子是一种多功能强力细胞因子，对促进成纤维细胞的代谢和胶原蛋白的形成发挥着重要功能。在体内的含量极微，但是具有很高的生物活性；能够促进和调控皮肤细胞的分裂、增殖和分化，对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用，具有延缓皮肤细胞衰老、促进表皮细胞的修复和生长作用，使皮肤光滑丰润，堪称我们的青春因子。市场上现有的技术主要是将细胞因子提取后制备成脂质体包裹物，或者注射液，或者涂抹剂，由于细胞因子生物活性会由于保存不当随着时间的延长慢慢消失这一时效性特点，因此并不能发挥细胞因子真正的效果。基于上述原因，直接将MSC为来源的细胞因子制备冻干粉视为保护细胞因子活性最为简单有效的办法，如专利CN106367386 A就采取直接将其冷冻干燥的方法进行保存，CN 106109496 A在此基础上加入海藻糖作为保护剂，进一步保护细胞因子的活性与性质，但是海藻糖或其他外源添加剂有可能引起排斥反应，造成过敏或吸收不良的状况。

发明内容：

为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用。

具体技术方案如下：

一种细胞生长因子冻干粉，其不同之处在于，所述细胞生长因子冻干粉是由脐带间充质干细胞传代培养2～3代的细胞培养上清液进行冰冻后制备而成，并加入人血白蛋白作为保护剂。

一种细胞生长因子冻干粉制备方法，其不同之处在于，其包括以下步骤：

A:将脐带间充质干细胞进行分离；

B:将脐带间充质干细胞加入培养基中进行传代培养；

C:收集步骤B中脐带间充质干细胞培养上清液，加入甘露醇与人血白蛋白后先将细胞培养上清液抽至离心管中放置低温冰箱或者液氮罐中冻存至固态状，使培养基完全冰冻结实，将固态状的冰冻培养基放置冻存瓶中，然后上机冷冻干燥12-24h制成冻干粉，并冷藏保存。

上述技术方案中，所述步骤A包括以下步骤:

A1：分离新鲜脐带血管周围的沃顿胶，剪碎；

A2：放入Ⅰ型胶原酶中，加入双抗和两性霉素B，混合均匀后置于培养箱中37℃过夜，取出后加入胰酶，再次置于培养箱中37℃，消化30min；

A3：消化后,用生理盐水稀释4～6倍后3000rpm离心15～20min；

A4：离心后弃上清液，加入培养基混悬后转入培养皿中，每皿加添加剂，双抗和两性霉素B,置培养箱中培养,根据培养状态进行换液，待细胞长满后传代培养。

上述技术方案中，所述步骤B包括以下步骤:

B1：细胞长满后进行传代，按1:(3～5)传代，吸取步骤A4中培养基至离心管；

B2:在离心管中加入生理盐水和浓度为0.05％胰酶，混匀消化，消化好后加入培养基终止消化；