[发明专利]一种体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法

权利要求书

1.一种体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：通过人工合成带上荧光的病毒，且带上荧光的病毒能靶向感染活性上皮肿瘤细胞；将带上荧光的病毒注入体外的人体混合液中，带上荧光的病毒将在上皮肿瘤细胞中复制，荧光被放大，通过对混合液中带上荧光病毒的识别，定位上皮肿瘤细胞，达到对上皮肿瘤细胞的检测；利用病毒靶向感染活性上皮细胞的特性，以及病毒携带荧光，并复制放大荧光的多重特性提高上皮肿瘤细胞在特定混合液中被发现的敏感性和特异性进行上皮肿瘤细胞的检测。

2.如权利要求1所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的带上荧光的病毒为任何可以带上荧光的病毒，且带上荧光的病毒只靶向感染上皮细胞，并在靶向感染上皮肿瘤细胞中大量复制，使荧光放大，便于在背景中识别，定位该细胞；并且带上荧光的病毒不感染血细胞，因此当带上荧光的病毒与血液混合时，血细胞不会带上荧光。

3.如权利要求2所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的带上荧光的病毒靶向感染上皮细胞是靶向感染活性上皮肿瘤细胞，使该细胞带上荧光，在24-72小时后在荧光显微镜下识别该细胞，定位该细胞；且带上荧光的病毒感染上皮细胞是单个上皮细胞，或多个上皮细胞组成的上皮细胞团。

4.如权利要求3所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的带上荧光病毒的荧光包括绿色荧光、红色荧光或者其他种类荧光；荧光为单色荧光或双色以上的荧光混合体，目的是进行荧光检测或分离定位。

5.如权利要求4所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的荧光检测或分离定位是联合应用物理分离和免疫化学分离，互为补充，克服单一方法分离的缺点，显著提高上皮肿瘤细胞发现和分离的效能。

6.如权利要求1所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的体外混合液是体外血液，或体外骨髓、胸水、腹水、脑脊液、淋巴液；所述体外混合液为血液时，所述上皮肿瘤细胞为循环血中肿瘤细胞，即单个循环血中肿瘤细胞（CTC），数个循环血中肿瘤细胞成团（CTM）。

7.如权利要求1所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的体外混合液是口腔、呼吸道、鼻腔、泌尿生殖道及消化道中排泄物，在排泄物上混有脱落的上皮肿瘤细胞，包括血痰、血尿、血便。

8.如权利要求1所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的混合液是细胞培养液。

9.如权利要求6至9任意一项权利要求所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的混合液包括了预先在实验动物体内或研究对象人体内注入了上述特殊病毒后收集的混合物或者是预先收集了混合物再加注上述特殊病毒后的混合物。

10.如权利要求1所述的体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，其特征在于：所述的对上皮肿瘤细胞的检测包括以下步骤：

1）病毒的准备

将病毒带上荧光，冻存至-80℃冰箱保存；

2）混合液准备

从待检测的各种体液中收取定量的混合液，用物理或化学方法去除可能干扰结果的因素。

3）培养

将冻存病毒复苏并过滤后加入处理后的混合液中，一起培养24~48小时，得到检测液；

4）检测

将检测液分别在0h，24h，48h 荧光显微镜下观察并记录，通过荧光计数判断检测结果。