[发明专利]人RBP胶体金免疫层析定量检测试纸卡及其临床应用

说明书

本发明涉及人视黄醇结合蛋白胶体金免疫层析定量检测试纸卡及其临床应用。本发明制备了多种人视黄醇结合蛋白抗体，并进行配对筛选，最终获得了灵敏度及特异性均能满足需求的抗体组合(B08及B14)；同时其方便大量生产，可满足日后大规模临床应用的需求。对上述抗体组合进行检测体系的调试优化工作，获得操作简便，灵敏度，特异性及相关检测性能可满足人临床样本检测的人视黄醇结合蛋白的胶体金定量检测卡，并可满足人血液或尿液样本的临床检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的涉及两种抗人视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Protein，RBP)抗体及其制备方法以及上述抗体在人视黄醇结合蛋白胶体金免疫层析定量检测中的应用。

背景技术

视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Protein，RBP)由一条多肽链及小部分碳水化合物组成，分子量约21KD，半衰期3～12小时。RBP主要由肝脏合成，具有从肝细胞中转运视黄醇至周围组织的功能，广泛分布于血液、脑脊液、尿液及其他体液中。在血液中，RBP与视黄醇、前白蛋白以1:1:1(mol)的复合物形式存在，转运体内90％的视黄醇至机体组织。当RBP与细胞表面的RBP受体结合时，视黄醇进入细胞内，复合物解体，游离的RBP从肾小球滤出，其中绝大部分被近端肾小管上皮细胞重吸收并被分解，供组织利用，仅少量从尿中排出。体内锌、铁缺乏及严重感染等疾病能降低RBP的生物合成。

在蛋白质营养不良时，肝的蛋白质合成不足并引起RBP不足，视黄醇不能进入血液，视黄醇对RBP的分泌起调节作用，两者呈正相关。RBP与前白蛋白一起参与维生素A的转运，血清RBP和血清维生素含量具有高度相关性，因此认为RBP可作为反映维生素A缺乏的敏感指标。另有研究表明，血清RBP水平是反映营养性疾病疗效的灵敏、特异性指标。测定视黄醇结合蛋白能早期发现肾小管的功能损害，并能灵敏的反映肾近曲小管的损害程度，还可作为肝功能早期损害和监护治疗的指标。临床中，血清RBP定量检测可用于各科室，如肾病科、ICU、急诊科、内分泌科、消化科、老年科、儿科等。

综上，制备抗人视黄醇结合蛋白特异性抗体并应用于制备人视黄醇结合蛋白定量检测试剂盒具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一组能有效的、特异性结合人视黄醇结合蛋白的抗体。更具体地说：

本发明的第一目的在于提供两种抗人视黄醇结合蛋白抗体。

第一种抗人视黄醇结合蛋白抗体(B08)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

优选的是本发明中的第一种抗人视黄醇结合蛋白抗体(B08)重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

第二种抗人视黄醇结合蛋白抗体(B14)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：9所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：10所示的HCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：11所示的HCDR3；

以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：12所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：13所示的LCDR2、和/或如序列SEQ ID NO：14所示的LCDR3。