[发明专利]球形节杆菌生产的酮糖3-差向异构酶

权利要求书

1.一种DNA，其中，

所述DNA编码具有下述（A）、（B）的底物特异性的酮糖3-差向异构酶，

所述DNA由序列表中的序列号2或序列号3所示的碱基序列或者与其互补的碱基序列构成，

（A）将D-或L-酮糖的3位差向异构化，生成对应的D-或L-酮糖；

（B）在D-或L-酮糖中对D-果糖和D-阿洛酮糖的底物特异性最高。

2.如权利要求1所述的DNA，其中，

所述酮糖3-差向异构酶具有下述（a）~（f）的物理化学性质，

（a）分子量：

通过SDS-PAGE测定的亚单位的分子量为约32kDa，通过凝胶过滤法测定的分子量为120kDa，并且为亚单位的分子量为32kDa的同源四聚体结构；

（b）最佳pH：

在30℃下反应30分钟，20mM的镁离子Mg²⁺存在的条件下为6至11；

（c）最佳温度：

在pH7.5下反应30分钟，20mM的镁离子Mg²⁺存在的条件下为60至80℃；

（d）pH稳定性：

在4℃下保持24小时的条件下至少在pH5至11的范围内稳定；

（e）热稳定性：

在pH7.5下保持1小时，4mM的镁离子Mg²⁺存在的条件下在约50℃以下稳定，在镁离子Mg²⁺不存在的条件下在约40℃以下稳定；

（f）通过金属离子的活化：

通过二价锰离子Mn²⁺、二价钴离子Co²⁺、钙离子Ca²⁺以及镁离子Mg²⁺活化。

3.如权利要求1或2所述的DNA，其中，

所述酮糖3-差向异构酶具有下述底物特异性（1）~（8），

（1）将D-果糖作为底物时的相对活性为43.8%；

（2）将D-阿洛酮糖作为底物时的活性为100%；

（3）将D-山梨糖作为底物时的相对活性为1.13%；

（4）将D-塔格糖作为底物时的相对活性为18.3%；

（5）将L-果糖作为底物时的相对活性为0.97%；

（6）将L-阿洛酮糖作为底物时的相对活性为21.2%；

（7）将L-山梨糖作为底物时的相对活性为16.6%；

（8）将L-塔格糖作为底物时的相对活性为44.0%，

其中，将D-阿洛酮糖的差向异构化活性作为100，将对各个酮糖的活性作为相对活性来表示。

4.如权利要求1或2所述的DNA，其中，

酮糖3-差向异构酶是D-阿洛酮糖异构酶。

5.一种载体，其中，

包含权利要求1~4中任意一项所述的DNA。

6.一种转化体，其中，

包含权利要求5所述的载体。

7.一种酮糖3-差向异构酶的制造方法，其特征在于，

培养权利要求6所述的转化体。

8.一种酮糖3-差向异构酶的制造方法，其特征在于，

培养权利要求6所述的转化体，从得到的培养物中采集酮糖3-差向异构酶。