[发明专利]一种检测布鲁氏菌的方法

说明书

本发明公开了一种快速检测布鲁氏菌感染的方法，该方法采用特异识别布鲁氏菌外表面抗原表位的抗体检测样本中布鲁氏菌菌体，解决了当前布鲁氏菌检测中存在的困难。有助于布鲁菌病的诊断、预防和治疗效果评价。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测布鲁氏菌的方法。

背景技术

布鲁菌病（Brucellosis）是目前世界上流行最广的人畜共患传染病之一，据世界卫生组织统计表明，全世界每年出现50万例人布鲁菌病，每年造成的经济损失达30亿美元。我国布病的流行以羊种布鲁杆菌为主的混合感染，羊种占流行株的80%。

布鲁菌病临床症状复杂，引起的发热、流产等病理损害易与某些常见疾病混淆；医生很难单凭有无病畜接触史来诊断布鲁杆菌感染，给诊断带来了一定的困难，容易导致误诊，造成慢性感染。另一方面缺乏有效的治疗手段，抗生素的大量长期使用仍很难见效，且容易引起耐药性问题。因此，布鲁杆菌的疫苗预防和早期快速诊断对布菌的防控具有重大的现实意义；其中疫苗的免疫效果和布菌诊断的准确性就显得尤为重要。

生化培养虽然是布鲁菌病检测的金标准，但是该方法存在耗时长，生物安全等方面诸多局限性，因此用特异性高的血清学检查仍然是主要采用的血清学方法，如我国主要通过RBPT和SAT相结合的方法进行布鲁菌病的初筛和诊断，评判治疗效果。但是这两种检测方法都存在一些问题，一是不能区分自然感染和疫苗免疫接种产生抗体的难题，严重影响了布鲁菌病的检测和疫苗免疫预防策略。二是RBPT法假阳性率较高，SAT法操作较为繁琐，耗费时间长，容易出现假阴性结果。M5-90是减毒羊种布鲁杆菌疫苗株， OMP31蛋白为膜孔蛋白，与该弱毒菌苗株毒力相关，并含有保护性抗原表位，其基因序列在不同的种属之间的同源性高达98％以上。因此，利用针对OMP31蛋白的单克隆抗体，可建立布鲁杆菌病原体及布鲁菌病诊断方法及其诊断试剂，进而解决布鲁菌病鉴别诊断、预防、治疗和预后判断等方面的技术难题。

发明内容

为了弥补已有技术的缺陷，本发明提供一种检测布鲁氏菌的方法。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，采用免疫荧光技术或流式细胞技术对布鲁氏菌进行检测。

进一步地，对布鲁氏菌进行检测所用的抗体特异性识别布鲁氏菌外膜蛋白或脂多糖。

进一步地，对布鲁氏菌进行检测所用的抗体特异性识别布鲁氏菌脂多糖、布鲁氏菌外膜蛋白OMP10、布鲁氏菌外膜蛋白OMP16、布鲁氏菌外膜蛋白OMP19、布鲁氏菌外膜蛋白OMP21、布鲁氏菌外膜蛋白OMP28、布鲁氏菌外膜蛋白OMP31、布鲁氏菌外膜蛋白OMP35中的一种或几种。

进一步地，对布鲁氏菌进行检测所用的抗体特异性识别以下表位中的一个或多个：

（1）布鲁氏菌外膜蛋白OMP10的27aa-42aa；

（2）布鲁氏菌外膜蛋白OMP16的37aa-52aa；

（3）布鲁氏菌外膜蛋白OMP19的36aa-50aa、67aa-80aa；

（4）布鲁氏菌外膜蛋白OMP21的57aa-71aa；

（5）布鲁氏菌外膜蛋白OMP25的33aa-49aa；

（6）布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的22aa-35aa、47aa-62aa、102aa-121aa；

（7）布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的42aa-57aa、77aa-91aa、95aa-102aa。

进一步地，对布鲁氏菌进行检测所用的抗体为特异性识别布鲁氏菌外膜蛋白OMP31和布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的混合物，或者是特异性识别布鲁氏菌外膜蛋OMP25和布鲁氏菌外膜蛋OMP28的混合物。