[发明专利]一种采用免疫试纸条对抗原进行定量检测的方法

说明书

本发明公开了一种采用免疫试纸条对抗原进行定量检测的方法。所述方法包括如下步骤：(1)在铂纳米颗粒表面修饰抗体；(2)在硝酸纤维素膜上划上待测抗原的包被抗体作为检测线，划上二抗作为质控线，并干燥处理；(3)铂标抗体喷涂到聚酯纤维膜上，真空干燥；(4)将吸水纸、硝酸纤维素膜、聚酯纤维膜和玻璃纤维膜顺序贴在PVC胶板上组装成试纸条；(5)将试纸条插入待测液中或者将待测液滴加到结合垫上，进行移液反应，剪下相应的含有检测线的试纸条片段，与H₂O₂反应产气并测量气压，所得气压差值与抗原浓度呈正相关关系。该方法具有灵敏、便携、廉价和易于操作等优点。

技术领域

本发明涉及一种基于铂纳米颗粒催化产气的免疫试纸条的制备，属于创新型免疫试纸条，可用于环境监测和疾病诊断等领域。

背景技术

免疫试纸条是上世纪九十年代初建立起来的基于抗原抗体免疫反应的检测技术，多借助金纳米颗粒的颜色进行便携可视化的检测。免疫试纸条一般是由样品垫、金标垫、硝酸纤维素(Nitrocellulose,NC)膜和吸水纸这四种材料构成，其检测抗原主要是通过双抗体夹心的方式进行，即首先在NC膜上以划线的形式划上检测抗原的抗体和二抗，分别作为检测线和质控线，然后将抗原的另一抗体修饰在金颗粒表面并喷在玻璃纤维或聚酯纤维上以制成金标垫，接着组装试纸条进行检测，最后通过检测线和对照线显示的条带进行分析样品的浓度。目前，以金颗粒颜色为信号输出的免疫金试纸条的市场化已相当成熟，被广泛地应用于蛋白质、小分子、细胞、细菌等靶标的检测，在环境监测、食品安全和疾病诊断等领域占有重要地位。(Q.Zeng,X.Mao,H.Xu,S.Wang,G.Liu,Quantitativeimmunochromatographic strip biosensor for the detection of carcinoembryonicantigen tumor biomarker in human plasma[J].Am.J.Biomed.Sci.1(2009)70；G.Liu,X.Mao,J.A.Phillips,H.Xu,W.Tan,L.Zeng,Aptamer-nanoparticle strip biosensor forsensitive detection of cancer cells[J].Anal.Chem.81(2009)10013；L.Wang,W.Ma,W.Chen,L.Liu,Y.Zhu,L.Xu,H.Kuang,C.Xu,An aptamer-based chromatographic stripassay for sensitive toxin semi-quantitative detection[J].Biosens.Bioelectron.26(2011)3059；X.Mao,Y.Q.Ma,A.G.Zhang,L.R.Zhang,L.W.Zeng,G.D.Liu,Disposable nucleic acid biosensors based on gold nanoparticle probesand lateral flow strip.Anal.Chem.81(2009)1660.)利用免疫金试纸条进行检测有便携、价格低廉和易于操作等优点，然而，此技术由于可视化本身的限制，只能提供定性和半定量的结果，并且需要借助金标读卡仪等贵重仪器才能得到定量分析的结果，使得在资源匮乏的地区或是野外的检测受到一定的局限。所以如何在保持原有的优势，又同时拥有如大型精密分析仪器(质谱、高效液相色谱等)般的高灵敏度和高特异性的精确定量技术，这是值得我们去探索和改进的地方。

发明内容

针对目前免疫金试纸条的定性或半定量以及需要借助金标读卡仪等贵重仪器得到定量分析结果等不足，提供一种采用免疫试纸条对抗原进行定量检测的方法，

本发明方法包括如下步骤：

(1)在铂纳米颗粒上修饰检测抗体，即为铂标抗体；

(2)在硝酸纤维素膜上划上抗原的包被抗体作为检测线，划上二抗作为质控线，并干燥处理；

(3)铂标抗体喷涂在聚酯纤维素膜上作为铂标垫，并干燥处理；