[发明专利]靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用，用于制备嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体包含顺序串联的白介素2信号肽、抗CD19单链抗体、CD8蛋白分子绞链区、跨膜区、胞内信号结构域及CD3ζ蛋白分子的胞内信号传导结构域。该嵌合抗原受体T细胞应用于制备治疗血液恶性肿瘤的药物或制剂；其中，血液恶性肿瘤包括CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病，弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。

技术领域

本发明属于免疫学和分子生物学技术领域，具体涉及一种靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用。

背景技术

传统的放、化疗、手术、造血干细胞移植等治疗方法延长了部分血液系统恶性肿瘤患者的生存时间，但是复发、难治甚至耐药现象，仍是目前面临的巨大挑战。

近年来，细胞免疫治疗因在肿瘤的肿瘤中取得了突破性进展，成为血液系统等多种肿瘤治疗的重要手段，被Science杂志列为2013年十大科学突破的首位。其中嵌合抗原受体T细胞免疫治疗进展尤为突出。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫治疗技术是在体外通过基因工程技术修饰患者自体或异体T细胞成为表达嵌合抗原受体的嵌合抗原受体T细胞。嵌合抗原受体分子中包括一个能特异地识别癌细胞表面抗原蛋白的单链抗体(scFv)，嵌合抗原受体中的scFv赋予了嵌合抗原受体T细胞特异地识别癌细胞的能力，当回输到病人体内后嵌合抗原受体T细胞就能特异性地杀死肿瘤细胞。嵌合抗原受体T细胞免疫治疗具有特异性强，安全性高，能长期有效控制甚至完全治愈肿瘤，是肿瘤治疗技术的重大突破。CD19抗原特异性表达于正常B细胞、B细胞前体细胞以及B系血液肿瘤细胞表面，而造血干细胞及非造血细胞则不存在CD19表达，因此针对CD19的细胞T细胞能特异地杀伤表达CD19恶性B细胞肿瘤。

过继性免疫细胞治疗(adoptive T-cell therapy，ACT)通过回输自体或经肿瘤特异性诱导的T细胞，在治疗一些到目前为止用其它手段几乎难以治愈的转移性恶性肿瘤如黑色素瘤方面取得重大成功；但由于回输T细胞在体内活性持续较短、缺乏肿瘤特异性及疗效不确切等诸多问题，在临床应用上受到限制。

发明内容

针对过继性细胞治疗中回输T细胞的这些不足，本发明提供了一种能够特异性地抑制、杀伤CD19恶性B细胞肿瘤的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种用于制备靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体，具体采用了以下技术方案：

一种靶向CD19的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含顺序串联的白介素2信号肽、抗CD19单链抗体、CD8蛋白分子绞链区、跨膜区、胞内信号传导结构域和CD3ζ蛋白分子的胞内信号传导结构域；

所述抗CD19单链抗体包括重链可变区、轻重链连接区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述轻重链连接区的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示；所述嵌合抗原受体的N-端以白介素2信号肽跟抗CD19单链抗体的重链可变区连接；

所述胞内信号结构域与跨膜区来自同一信号蛋白分子，所述的信号蛋白分子选自CD27、CD28、人肿瘤坏死因子受体9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3或者与CD83特异性结合的配体。

优选的，所述白介素2信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

优选的，所述CD8蛋白分子铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

优选的，所述CD3ζ蛋白分子胞内信号传导结构域(或者刺激信号释放区)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。