[发明专利]一种核苷及碱基类物质的分离方法及其应用

权利要求书

1.一种核苷及碱基类物质的分离方法，其特征在于，其包含以下步骤：采用高效液相色谱法对核苷及碱基类物质进行分离，即可；

所述的高效液相色谱法中的色谱柱为三键键合的酰胺基键合相的氨基色谱柱；

所述的高效液相色谱法中的流动相为含盐水溶液和极性有机溶剂；

所述的核苷及碱基类物质为腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和鸟嘌呤。

2.如权利要求1所述的核苷及碱基类物质的分离方法，其特征在于，所述的三键键合的酰胺基键合相的氨基色谱柱为XBridge Amide柱；

所述的含盐水溶液中盐的种类为甲酸铵和/或乙酸铵；

和/或，所述的含盐水溶液中盐的浓度为10mmol/L。

3.如权利要求1所述的核苷及碱基类物质的分离方法，其特征在于，所述的含盐水溶液和/或所述的极性有机溶剂中含有甲酸，所述甲酸的浓度优选为0.1％，百分比是指体积百分比。

4.如权利要求1所述的核苷及碱基类物质的分离方法，其特征在于，所述腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和鸟嘌呤以溶液形式存在，所述溶液中的溶剂为水溶液、或、乙腈与水的混合溶液；

所述含盐水溶液为含有5mmol/L的甲酸铵、5mmol/L的乙酸铵和0.1％的甲酸的水溶液，所述百分比是指体积百分比；

和/或，所述的极性有机溶剂为乙腈。

5.如权利要求1所述的核苷及碱基类物质的分离方法，其特征在于，所述的高效液相色谱法采用梯度洗脱，所述梯度洗脱时所述的含盐水溶液和所述的极性有机溶剂的体积比为8:92～50:50。

6.如权利要求1所述的核苷及碱基类物质的分离方法，其特征在于，所述的流动相的流速为0.3～1.5mL/min，优选为0.4mL/min；

和/或，所述高效液相色谱法的进样量为1μL～5μL，优选为2μL；

和/或，所述的色谱柱的填料颗粒度为1.7μm～5μm，优选为3.5μm；

和/或，所述的色谱柱的长度为50mm～250mm，优选为100mm；

和/或，所述的色谱柱的柱温为25～40℃，优选为35℃；

和/或，所述高效液相色谱法中的高效液相色谱仪为Thermo scientificDionexUltiMate 3000液相色谱仪。

7.一种如权利要求1～6任一项所述的核苷及碱基类物质的分离方法在核苷及碱基类物质分析检测中的应用，其特征在于，其包含以下步骤：将所述高效液相色谱法中的高效液相色谱仪与检测器联用，对核苷及碱基类物质进行分析检测，即可；所述核苷及碱基类物质为腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和鸟嘌呤。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测器为质谱检测器，优选为三合一组合型高分辨质谱仪，更优选为Thermo Scientific的Orbitrap Fusion Lumos质谱仪。

9.一种如权利要求1～6任一项所述的核苷及碱基类物质的分离方法在核苷及碱基类物质含量测定中的应用，所述核苷及碱基类物质为腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和鸟嘌呤。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述核苷及碱基类物质的待测物为瓜蒌皮注射液。