[发明专利]一种检测T1基因rs1047896多态位点的试剂盒、使用方法及应用

说明书

本发明公开一种检测T1基因rs1047896多态位点的试剂盒、使用方法及应用，属于生物医学技术领域。首次发现rs1047896多态位点影响T1蛋白表达并与冠心病相关，根据此发现提供了一种检测T1基因rs1047896多态位点的试剂盒，包括特异性引物对、特异性等位基因荧光探针等。该试剂盒以待检测样品细胞的基因组DNA为模板，采用试剂盒提供的引物和探针序列，确定rs1047896多态位点的基因型，然后根据提供的风险值预测冠心病的患病风险，可用于冠心病的预防和辅助诊断。

技术领域

本发明涉及一种检测T1基因rs1047896多态位点的试剂盒、使用方法及应用，属于生物医学技术领域。

背景技术

心血管疾病是仅次于恶性肿瘤的第二号杀手，是造成死亡的主要原因之一。目前我国约有2.3亿人患冠心病、脑卒中、心力衰竭和高血压等心血管病。死于心血管病者每年近300万人。冠心病是主要的心血管疾病，找到这类疾病的早期预警标志物对于心血管疾病的预防有重要意义。

目前单核苷酸多态(SNP)与冠心病之间的关联研究是寻找预测冠心病易感性的预警标志物的主要方法之一。SNP是指基因组DNA水平单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。SNP在正常人群广泛存在。人类无论种族在基因组DNA序列上超过99％的序列都是相同的，SNP是个体间的遗传差异的主要表现。SNP可以在染色体印迹、DNA修饰、RNA二级结构、蛋白空间结构等多个水平上影响基因的表达及活性。另外SNP遗传稳定性好，易于分析，因此SNP成为疾病预警的主要标志物。目前找到更多的与冠心病相关的SNP，对于未来冠心病的个体化医疗、精准医学有必要作用。

近年来研究发现脑源性神经营养因子及其受体酪氨酸激酶受体B(TrkB)通路除了在中枢和外周神经元的生存、生长和维持中发挥重要作用外，也在心血管系统表达和发挥作用。研究表明该通路能促进心肌存活，促进胚胎发育中的血管生成以及成年心梗后的心肌内血管生成。我们的研究发现TrkB在人和小鼠的主动脉内皮中大量表达，通过促进内皮钙粘蛋白的合成维持内皮完整。我们以前的研究还发现不稳定心绞痛病人的血浆脑源性神经营养因子浓度显著低于对照组，而且高的血浆脑源性神经营养因子浓度指示低的急性心血管事件发生率和低的死亡率，提示该通路在冠心病的发病及预后中发挥重要作用。我们的这一结果引起美国心肺血研究所Framingham心脏研究中心主任Vasan S.Ramachandran的兴趣，于是他领导了大样本的孟德尔随机临床研究(Kaess BM，et al.J Am HeartAssoc.2015；4:e001544)，进一步证实了我们的结论，即脑源性神经营养因子通路与冠心病存在因果关系。

T1蛋白是体内神经酪氨酸激酶受体2(NTRK2)的截短表达形式，是脑源性神经营养因子的另一种受体。T1与TrkB拥有相同的胞外域，但是却有不同的胞内域，缺少TrkB的胞内激酶区，因此能与TrkB竞争结合细胞外的脑源性神经营养因子，却不能活化细胞内分子通路。TrkB蛋白是胚胎发育期间高表达的脑源性神经营养因子受体；而在成年期，TrkB蛋白表达相比胚胎发育期间明显降低，而T1蛋白成为脑源性神经营养因子主要的受体表达形式。未来针对冠心病的个体化医疗迫切需要大量的与冠心病相关的SNP，我们前期研究曾发现影响TrkB蛋白表达水平的一个多态位点与冠心病相关，但目前尚没有关于T1多态位点与冠心病相关联的研究报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测T1基因rs1047896多态位点的试剂盒、使用方法及应用，首次发现了一个影响T1蛋白表达的功能多态位点，该多态位点为rs1047896多态位点，位于T1mRNA的3′非翻译区(UTR)，而且该多态位点与冠心病相关，可用于预测冠心病的易感性和未来冠心病的个体化医疗。

本发明的技术方案如下：