[发明专利]一种剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法

说明书

本发明提供了一种剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法，具体包括如下步骤：(1)外植体的选择；(2)诱导获得愈伤组织；(3)愈伤组织增殖培养；(4)愈伤组织分化培养，MS分化培养基中添加1－3mg/L的噻苯隆TDZ、0.1－0.5mg/L的激动素KT、0.1－0.5mg/L芸苔素内酯和2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP；(5)生根培养，1/2MS生根培养基中添加0.5－1.0mg/L的萘乙酸NAA和2g/L的活性炭；(6)炼苗移栽。剑叶龙血树丛生芽增殖系数达到5－12倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率达90％以上，移栽成活率在95％以上，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的剑叶龙血树幼苗。

技术领域

本发明涉及苗木无性繁殖技术领域，特别涉及一种剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法。

背景技术

剑叶龙血树(Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen)为百合科龙血树属，又名千年木、血竭树、交趾龙血树，其性味甘，温，咸平，有活血化瘀，消肿止痛，收敛止血之功效，主要用于跌打损伤，金疮出血及心腹绞痛等，属国家重点保护野生植物，濒危稀有物种。剑叶龙血树具有很高的药用价值，为我国传统名贵中药材。我国剑叶龙血树资源越来越少，中药资源用量急剧上升，近年来，市场对龙血竭与是俱增，从而导致人们对剑叶龙血树野生资源毁灭性的采伐，濒危灭绝，已被很多国家列为珍稀濒危植物。

通过组织培养的方式进行繁殖，其繁殖速度快，苗木质量好，可达到规模化生产的目的。剑叶龙血树的组培条件比较苛刻，一般的培养组培条件很培养出剑叶龙血树或者培养出来的剑叶龙血树的褐化率极高。为此，剑叶龙血树的组织培养的难度在于：问题一，探索剑叶龙血树愈伤组织诱导的最佳激素因子和条件以此增加愈伤组织的诱导率；问题二，通过添加防褐化物质、改变培养环境等方式找到更佳的抑制褐化办法，以期有效降低褐化率，建立高质量的剑叶龙血树愈伤组织培养体系；问题三、探索剑叶龙血树愈伤组织的分化、生根培养的最佳激素因子和条件以此提高剑叶龙血树丛生芽增殖系数和生根率。目前利用组织培养技术繁殖剑叶龙血树的研究只有两篇对比文件，对比文件1：专利申请号为“CN201510755473.7”，专利名称为“一种剑叶龙血树疏松愈伤组织诱导的方法”解决是上述技术问题一；对比文件2：专利申请号为“CN201410735185.0”，专利名称为“一种剑叶龙血树愈伤组织诱导及防褐化的方法”，解决的是所述技术问题二；以上两篇对比文件均未探索及解决问题三中的后续剑叶龙血树愈伤组织的分化、生根培养的最佳激素因子和条件。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法，采用本发明所述的培养方法得到的剑叶龙血树丛生芽增殖系数达到5-12倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达90％以上，移栽成活率在95％以上，可在短时间内可培育出大量适合栽培种植的剑叶龙血树幼苗，保障剑叶龙血树苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

本发明是这样实现的：

本发明提供一种剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法，具体包括如下步骤：

步骤1、外植体的选择：取剑叶龙血树无菌试管苗作为外植体；

步骤2、培养基诱导获得愈伤组织：将外植体置于诱导培养基中诱导得到愈伤组织；

步骤3、愈伤组织增殖培养：将步骤2中得到的愈伤组织置于MS继代培养基中进行增殖培养获得大量愈伤组织；

步骤4、愈伤组织分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织置于MS分化培养基中进行分化培养获得大量丛芽，其中MS分化培养基中添加2.0mg/L的噻苯隆TDZ、0.2mg/L的激动素KT、0.5mg/L芸苔素内酯、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；