[发明专利]一种筛选分化hPSCs向MSCs的方法在审
| 申请号： | 201810075894.9 | 申请日： | 2018-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN108570447A | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 王淋立;李强;陈月花;关春燕 | 申请（专利权）人： | 皓昇莱生物制药有限公司;王淋立 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12N5/0775;C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 胡辉 |
| 地址： | 510663 广东省广州市广州科*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养板 细胞外基质 细胞消化 包被 筛选 分化 大规模培养 明胶 细胞筛选 未分化 细胞株 贴壁 | ||
1.一种筛选分化hPSCs向MSCs的方法，其步骤是：
1)将未分化hPSCs细胞株转移到细胞外基质包被的培养板上培养；
2)将细胞消化并转移到由明胶类细胞外基质包被的培养板中，进行细胞筛选培养；
3)将细胞消化并转移到贴壁用培养板上继续培养，获得MSCs。
2.根据权利要求1所述的分化方法，其特征在于，步骤1)中，培养的方式是：用含有TGF-β1/Activin/Nodal-SMAD2/3信号通路抑制剂的分化培养基培养。
3.根据权利要求1所述的分化方法，其特征在于，步骤2)的方法是：先将细胞消化悬浮，移到经明胶类细胞外基质包被的贴壁用培养板上，用含有TGF-β1/Activin/Nodal-SMAD2/3信号通路抑制剂的分化培养基继续培养。
4.根据权利要求2或3所述的分化方法，其特征在于，TGF-β1/Activin/Nodal-SMAD2/3信号通路抑制剂为SB431542、A8301、SB505124或RepSox中的至少一种。
5.根据权利要求2所述的分化方法，其特征在于，步骤1)中，含有TGF-β1/Activin/Nodal-SMAD2/3信号通路抑制剂的分化培养基培养时间为5～30天。
6.根据权利要求1所述的分化方法，其特征在于，步骤2)中，培养时间为5～30天。
7.根据权利要求1所述的分化方法，其特征在于，步骤2)中，细胞筛选培养得到的细胞为具有梭型形态特征，表面标志CD90、CD73、CD105为阳性，CD34、CD45、CD14或CD11b、CD79α或CD19以及HLA-DR为阴性。
8.根据权利要求1所述的分化方法，其特征在于，步骤3)中继续培养的方法是：用含有间充质干细胞培养基培养。
9.根据权利要求1所述的分化方法，其特征在于，步骤2)中，明胶类细胞外基质为：细胞培养用明胶或I型、III型、IV型、V型胶原蛋白和弹性蛋白以及层粘连蛋白。
10.一种MSCs细胞，该细胞由权利要求1～9任意一项所述的分化方法制备而成。
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