[发明专利]一株不产灵菌红素的粘质沙雷氏菌及其制备舍雷肽酶的应用

说明书

本发明公开了一株不产灵菌红素的粘质沙雷氏菌突变株及其制备舍雷肽酶的应用，粘质沙雷氏菌MW‑9菌株不产灵菌红素，有效地改善了成品舍雷肽酶的品质；粘质沙雷氏菌MW‑9菌株产舍雷肽酶活性稳定，摇瓶发酵产酶活力稳定在1000U/mL左右。

(一)技术领域

本发明涉及一株不产灵菌红素的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)MW-9菌株，及其在发酵制备舍雷肽酶中的应用。

(二)背景技术

舍雷肽酶(serratiopeptidase，serrapeptase或serralysin)，又名沙雷肽酶、沙雷蛋白酶等，是一种源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的碱性蛋白酶，最初产该酶的粘质沙雷氏菌E15菌株分离自家蚕蚕蛹肠道，蚕蛹就是利用肠道内粘质沙雷氏菌产生的舍雷肽酶破茧而出。舍雷肽酶被人们称之为“奇迹之酶”，它有良好的抗炎、抗肿胀、促进痰液、脓液溶解与排泄以及镇痛作用，临床用于手术后及外伤的消炎；副鼻窦炎、乳汁潴留性乳腺炎、膀胱炎、附睾炎、智齿周围炎及牙槽脓肿时的消炎；以及治疗支气管炎、肺结核、支气管哮喘时痰液不易咳出等。研究也表明，舍雷肽酶具有出色的纤溶活性，在治疗动脉粥样硬化方面也有潜在的应用。目前市场上已有舍雷肽酶相关药品，如国内市场上的“达先”、“释瑞达”和“曲坦”等，国外市场上的“Dasen”和“Seradase”等；舍雷肽酶也可作为非处方药使用，具有对抗炎症、解除疼痛和肿胀，加速复原与激发免疫系统等功效，产品如市场上的“Serretia”、“Natto-Serra”和“SerraGold”胶囊等。

近些年来，因其良好的临床使用效果，舍雷肽酶的使用量逐年增长，特别是为辅助治疗药物和保健食品的市场急剧增长。目前，国内虽有一些企业在销售舍雷肽酶，但并非采用粘质沙雷氏菌发酵，而是采用枯草芽孢杆菌发酵的普通蛋白酶，此类产品不能称为舍雷肽酶，所以国内舍雷肽酶类药物的原料都从国外进口，也未见相关发酵工艺研究的报道。日本和印度工业化生产规模较大，国际市场多向这两个国家采购，所以国内迫切需要开发具自主知识产权的舍雷肽酶生产工艺。

产舍雷肽酶的粘质沙雷氏菌，又名灵杆菌，是革兰氏阴性兼性厌氧杆菌，属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)沙雷氏菌属(Serrtia)。该菌的最大特征在28～30℃下培养产生鲜红的色素—灵菌红素(prodigiosin，又称灵杆菌素)；高于37℃培养不产生红色色素，灵菌红素具有抗菌、抑癌、提高免疫力等生理活性，也具有一定的开发潜质。

中国发明专利CN201610407429.1公开了一株舍雷肽酶产生菌LL-413及其在发酵制备舍雷肽酶中的应用，所用的产酶菌株粘质沙雷氏菌LL-413分离自家蚕蚕蛹肠道，野生菌株在用于发酵生产舍雷肽酶中存在2个缺点，一是在30℃下产酶发酵，会产生红色色素—灵菌红素，酶的分离过程不能完全去除该色素，从而影响成品酶的色泽；二是产酶活力不稳定，随着菌种传代次数增多，产酶单位逐渐下降。为此，本发明对粘质沙雷氏菌LL-413进行了紫外线和微波连续诱变，选育出不产灵菌红素，产酶活力高且稳定的突变株，应用于舍雷肽酶的生产。

(三)发明内容

本发明提供一株产舍雷肽酶的突变菌株—粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)MW-9菌株，及其在制备舍雷肽酶中的应用，该菌株具有的显著优点是不产灵菌红素且产酶活力稳定，有效地改善了发酵中产酶活力不稳定性和产品色泽差的问题。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供一株产舍雷肽酶，但不产灵菌红素的粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)MW-9菌株，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:60315，保藏日期2018年1月18日，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510075。