[发明专利]一种人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株及其构建方法和应用

说明书

本发明提供一种人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株CEM‑C7/HDR及其构建方法和应用，其保藏编号为CCTCC NO：C2017233，该细胞株以急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素敏感细胞株CEM‑C7‑14为诱导对象，模拟急性T淋巴细胞白血病细胞在骨髓中生存环境，采用0.25μM地塞米松1次诱导培养得到对糖皮质激素稳定耐药的细胞株CEM‑C7/HDR，其对地塞米松的半数抑制浓度是亲本细胞的1500倍以上。本发明为复发难治人急性淋巴细胞白血病的研究和生物医药研发提供新的细胞模型，在探索人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药的发病机制、复发难治机制和逆转耐药药物研发的应用中有较大的实用价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，特别涉及一种人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株及其构建方法和应用。

背景技术

急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）是儿童期最常见的恶性肿瘤，虽然，近50年，儿童ALL的预后取得了飞跃式的进展，5年生存率从1960s的10%提高到90%，但仍有10～20%的患者难治、复发，预后差。由于ALL在15岁以下儿童的高发病率，其仍然是导致儿童肿瘤性死亡的重要原因。急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）是一组源于T系淋巴前体细胞或淋巴母细胞的恶性克隆性疾病，约占儿童ALL的10～15%，成人T-ALL比例高于儿童，一般为20～25%，其预后明显差于B-ALL。大于70%的T-ALL患者属高危ALL，易于早期复发，其5年生存率为40～70%。

糖皮质激素（glucocorticoid，GC）耐药是ALL复发、难治的重要原因之一。GC能特异性诱导恶性淋巴细胞增殖停滞并促发凋亡，一直是治疗ALL和其他淋巴源性恶性肿瘤的首选药物之一，几乎所有ALL联合化疗方案均包含GC。目前化疗方案中常用的GC是强的松和地塞米松。GC敏感性是儿童ALL临床危险度分组，指导治疗和判断预后的重要指标之一，GC耐药是临床亟待解决的治疗难题。因此，建立T-ALL GC耐药细胞模型，将有助于阐明GC耐药的分子机理，找到早期精确预警GC耐药生物标志物，完善白血病危险度分型，明确逆转耐药的治疗靶点，建立个性化高效低毒的化疗方案；有利于解决目前难治、复发ALL治疗的难点，进一步提高儿童及成人ALL，乃至其他淋巴源性肿瘤治愈率，改善患者长期生存质量，极具临床应用价值。

药物筛选法是建立肿瘤耐药细胞株的常用方法，具体技术分为两种，一是逐步增加药物浓度、持续诱导法，二是大剂量冲击间断给药法，或者两种方法结合实用。通过上述方法目前国内外已经建立了多种肿瘤的耐药细胞株，但是获得耐药细胞株所需时间较长，超过6月，且实验过程中需要用药物对细胞进行筛选加压，以维持耐药特性。CEM-C7-14是T-ALL细胞株，源于1964年从一名3岁白人女孩外周血中分离建立的CCRF-CEM细胞株，1977年Thompson教授从中挑选单克隆，获得对GC敏感的CEM-C7-14细胞，CEM-C7-14细胞对GC高度敏感，其48小时对地塞米松的半数抑制浓度在0.037±0.003μM，传统药物筛选法很难在CEM-C7-14细胞株的基础上成功构建GC耐药细胞株。

发明内容

本发明提供了一种人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株，其细胞名称是人急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM-C7/HDR，保藏编号为：CCTCC NO：C2017233，保藏日期：2017年10月25日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。

本发明还提供所述的人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株CEM-C7/HDR的构建方法：其过程是，先将对数生长期的人急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM-C7-14按1～3×10⁴个/ml接种，置于低氧环境下培养至细胞密度为1～3×10⁵个/ml（时间约4天）后一次性的加入0.25μM地塞米松，然后继续培养至细胞密度为2～10×10⁵个/ml（时间约4周），然后置于常氧条件下扩大培养，从而获得人急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株CEM-C7/HDR。