[发明专利]番茄转化方法及应用

说明书

本发明涉及遗传工程技术领域，具体而言，提供了一种番茄转化方法及应用。本发明提供的番茄转化方法，将侵染处理后的番茄外植体在湿度为70‑90％的条件下进行转化培养。相对湿度较高的培养条件极大地促进了番茄外植体愈伤组织的生长，可以显著提高番茄外植体的成活率和转化效率。该方法适用于各种番茄品种和外植体类型，普适性好，节约资源，节省人力物力，降低了成本。

技术领域

本发明涉及遗传工程技术领域，具体而言，涉及一种番茄转化方法及应用。

背景技术

番茄是一种重要的蔬菜，具有重要的经济价值和研究价值。番茄也是较早进行基因转化研究的高等植物之一，现已成为基因工程研究的模式植物之一。目前，番茄的遗传转化技术中使用最多同时技术也最为成熟的为农杆菌介导法。这一技术主要依赖以组织培养为主的番茄离体再生体系，所以番茄再生系统的建立至关重要，是成功进行遗传转化的前提和保障。

农杆菌介导法的主要操作流程如下：首先选择作为研究对象的番茄品种，在无菌条件下，将一定量的种子播于培养基中，待种子萌发后，切取下胚轴和子叶，接种于诱导培养基中，诱导产生愈伤组织或再生芽，接着多次传代培养，将合适大小的再生芽转种于生根培养基，进行生根培养，最后移栽至土壤中。

上述方式有如下的缺陷：1)周期长，大约需要90天甚至更多的时间；2)受番茄基因型的限制，不同番茄品种的再生能力不同，需要逐一摸索再生条件；3)受番茄外植体类型的限制，不同类型外植体的分化能力不同，甚至不能再生；4)需要添加激素，番茄外植体的再生需要激素的添加才能实现，同时不同番茄基因型和番茄外植体类型需要添加不同浓度的不同激素；5)操作繁琐，组培再生需要多次传代，此过程极大增加了微生物污染概率，降低转化效率；6)需要用到无菌操作。开发一种操作简便，转化周期短同时转化效率高的方法显得尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种番茄转化方法，以缓解现有技术中转化方法普适性差，操作过程繁琐，转化周期长，同时费时费力，转化效率低并且成本较高的问题。

本发明的第二目的在于提供上述番茄转化方法在制备番茄新品种中的应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供一种番茄转化方法，将侵染处理后的番茄外植体在湿度为70-90％的条件下进行转化培养。

进一步地，所述转化培养的条件还包括：温度为20-25℃，光照周期为光培养12-18h和暗培养6-12h，培养20-40天；

优选地，所述光照周期为光培养12-16h和暗培养8-12h。

进一步地，所述侵染处理包括将侵染菌液添加到番茄外植体的断面处；

优选地，所述侵染处理的次数为2-3次；

优选地，所述番茄外植体为番茄下胚轴；

优选地，所述侵染菌液的使用量为每个番茄外植体的断面处添加1-2μL。

进一步地，所述侵染菌液包括农杆菌和侵染培养基；

优选地，所述侵染培养基包括：MS培养基，2.5-3.5％(w/w)蔗糖，150-250μmol/L乙酰丁香酮，450-550mg/L半胱氨酸和4-6％(w/w)SilwetL-77；

优选地，所述农杆菌为根癌农杆菌。

进一步地，所述侵染菌液的OD600为0.6-1.0。

进一步地，先将番茄外植体预培养1-2天后再进行所述侵染处理操作；