[发明专利]一种肝癌诊断标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种肝癌诊断标志物及其应用，属于生物医药领域。本发明通过microRNA加尾荧光定量PCR的方法分别在肝癌组织标本、肝癌细胞系中检测和验证了4个microRNA在肝癌癌组织、肝癌细胞中的表达差异，获得了可用作肝癌标志物的RNA分子。

技术领域

本发明涉及一种肝癌诊断标志物及其应用，属于生物医药领域。

背景技术

肝癌是全球发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一，每年全世界一半以上的新发和死亡肝癌患者发生在中国。其中，绝大部分的肝癌属于肝细胞癌。寻找合适的生物标志物对于肝癌的诊断和治疗具有重要意义。MicroRNA是一类长度约为22-24个核苷酸的非编码RNA，它们能在转录后层次上调控基因表达。由于本身功能的特殊性，microRNA具有较好的表达特异性，能够稳定存在于组织和血液中，可以作为疾病诊断、预后以及治疗的生物标志物。

发明内容

本发明首先提供一种肝癌标志物，其碱基序列如SEQ ID NO:1(miR-378a-3p)、SEQID NO:2(miR-490-3p)、SEQ ID NO:3(miR-381-3p)或SEQ ID NO:4(miR-101-3p)所示。

所述肝癌标志物可用于制备辅助诊断肝癌的工具，或者用于制备辅助预后判断的工具，或者用于制备筛选治疗肝癌的药物的工具。

本发明通过microRNA加尾荧光定量PCR的方法分别在肝癌组织标本(28对癌、癌旁组织)、肝癌细胞系(8种)中检测和验证了4个microRNA(miR-101-3p、miR-378a-3p、miR-490-3p、miR-381-3p)在肝癌癌组织、肝癌细胞中的表达差异。在组织标本水平上，25/28癌组织miR-101-3p表达下调；23/25癌组织miR-378a-3p表达下调；26/28癌组织miR-490-3p表达下调；18/28癌组织miR-381-3p表达下调。在细胞系水平，8/8癌细胞miR-101-3p表达下调；8/8癌细胞miR-378a-3p表达下调；8/8癌细胞miR-490-3p表达下调；5/8癌细胞miR-381-3p表达下调。通过原位杂交的方法，本发明分析了90例配对肝癌组织芯片中miR-378a-3p的表达及miR-378a-3p表达水平与肝癌患者临床病理因素及预后的相关性，结果表明，miR-378a-3p在肝癌组织中的表达显著减少，与肿瘤大小、血管浸润、TNM分期呈负相关，并与肝癌患者预后差相关。

附图说明

图1肝癌组织microRNAqPCR扩增曲线代表性图。(a)1#病例癌旁组织microRNAqPCR扩增曲线；(b)1#病例癌组织microRNAqPCR扩增曲线。

图2肝癌组织microRNAqPCR溶解峰代表性图。(a)1#病例癌旁组织microRNAqPCR溶解峰；(b)1#病例癌组织microRNAqPCR溶解峰。

图3肝癌组织microRNAqPCR结果(2^-ΔΔT法)。(a)以各自配对癌旁组织为对照的癌组织miR-378a-3p的相对表达；(b)以各自配对癌旁组织为对照的癌组织miR-490-3p的相对表达；(c)以各自配对癌旁组织为对照的癌组织miR-381-3p的相对表达；(d)以各自配对癌旁组织为对照的癌组织miR-101-3p的相对表达；(e)以各自配对癌旁组织为对照的癌组织miR-221-3p的相对表达；(f)以各自配对癌旁组织为对照的癌组织miR-25-3p的相对表达。