[发明专利]一种基于试剂盒的针对人血液中高分子量基因组DNA的提取方法

说明书

本发明公开了一种基于试剂盒的针对人血液中高分子量基因组DNA的提取方法，包括以下步骤：步骤一：血液样本：预先准备好血液样本、Magen磁珠法组织与D6312血液DNA提取试剂盒，步骤二：细胞裂解：(a)取一个灭菌的1.5ml离心管，加入20ul蛋白酶K，再取200ul血液样本加入到离心管中，立即震荡混匀1秒。本发明通过优化其提取实验步骤和流程从而获取到高纯度、高完整性的高分子量DNA片段，可以满足下游Long‑read测序的需要，DNA无RNA和蛋白污染，DNA片段完整性高，无降解，单个样本提取时间要比常规提取时间短一些，而且也可以进行多个样本的提取，且提取时间并不会增加很多，DNA分子在45kb以上，最大达到130kb左右，结果非常好，完全适合Long‑read测序技术。

技术领域

本发明涉及DNA提取领域，特别涉及一种基于试剂盒的针对人血液中高分子量基因组DNA的提取方法。

背景技术

随着高通量测序技术的发展，Long-read(长读长)测序技术愈发受到科学界的青睐，许多Long-read测序平台如PacBio公司的sequel系统、Oxford nanopore公司的MinION和GridION系统均在最前沿的基因测序领域如基因组de novo、变异检测、转录组、表观遗传、临床应用中均扮演了重要的角色。而这些Long-read测序平台因为测序读长长的原因，也对基因组DNA提取提出了更高的要求。研究人员不仅要保证基因组DNA的得率和纯度，还需要获得更完整的高分子量的基因组DNA以满足下游Long-read测序技术的需求，从而在基础科研及医学应用上获得更可靠的技术支持。

目前针对人血液基因组DNA提取主要分为试剂盒提取和传统的酚氯仿抽提。前者虽然提取便捷，但很难获得高分子量的DNA，所提取出来的DNA分子通常在20kb左右，在Long-read测序应用中差强人意。而传统的酚氯仿抽提方法不仅耗时耗力，还含有有毒成分，存在安全隐患，且也较难提取到40kb 以上的高分子量的DNA。2012年，Zhang.et al(Zhang.et al.Preparation of megabase-sized DNA from a variety of organismsusing the nuclei method for advanced genomics research.[J].Nature Protocols,2012, 7(3):467-78.)发表了一篇利用细胞核分离的方法进行高分子量基因组DNA 的提取，但是该方法具有两个缺陷。首先，该方法可以提取出来1000kb的超高分子量DNA，但是目前的Long-read测序平台并不需要这么大的基因组DNA， 100kb已是其极限，过长的DNA片段反而会成为现有测序技术的负担。另外，该方法提取制备DNA需要3天的时间，非常耗时耗力。因此该方法并不适合目前的测序领域。

因此，发明一种基于试剂盒的针对人血液中高分子量基因组DNA的提取方法来解决上述问题很有必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于试剂盒的针对人血液中高分子量基因组 DNA的提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于试剂盒的针对人血液中高分子量基因组DNA的提取方法，包括以下步骤：

步骤一：血液样本：预先准备好血液样本、Magen磁珠法组织与D6312血液DNA提取试剂盒；