[发明专利]一种电化学细胞传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种电化学细胞传感器，其特征在于，所述电化学细胞传感器是通过适配体修饰的氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子特异性识别循环肿瘤细胞，再连接伴刀豆球蛋白A修饰的多孔的Pd@Au核壳纳米粒子形成的电化学夹心式细胞传感器，

所述适配体修饰的氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子的制备方法如下：

1）氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子悬浮在PBS中，并与戊二醛溶液混合得到混合物A；

2）将混合物A在室温下反应，接着用PBS在外部磁场下分离洗涤除去未反应的戊二醛得到样品；

3）将获得的样品再分散在PBS中得到溶液，将溶液与氨基修饰的SYL3C适配体混合，轻轻摇动孵育得到混合物B，然后，使用PBS将得到的混合物B在外部磁场下清洗数次并分离得到固体混合物，固体混合物用PBS悬浮得到溶液A；所述氨基修饰的SYL3C适配体，其序列为：5′-NH₂-CAC TAC AGA GGT TGC GTC TGT CCC ACG TTG TCA TGG GGG GTT GGC CTG-3′，

4）然后，将牛血清白蛋白溶液加入到步骤3）的溶液A中以封闭非特异性结合位点得到溶液B；

5）将溶液B在外部磁场下用PBS洗涤3次，最后再分散于PBS中得到Fe₃O₄@SiO₂-NH₂ /aptamer/ BSA偶联物；

所述伴刀豆球蛋白A修饰的多孔的Pd@Au核壳纳米粒子的制备方法如下：

A）氯金酸水溶液、四氯钯酸钠和氯化十六烷基吡啶溶于超纯水中，并充分混合得到溶液，将新配制的抗坏血酸溶液快速加入溶液中反应后得到多孔的Pd@Au核壳纳米粒子；

B）取多孔的Pd@Au核壳纳米粒子与伴刀豆球蛋白A溶液混合到超纯水中，慢慢振荡过夜，离心除去上清液，沉淀用超纯水清洗数次，再用含有Mn²⁺和Ca²⁺的PBS缓冲溶液重新悬浮即得伴刀豆球蛋白A修饰的多孔的Pd@Au核壳纳米粒子；所述氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子的粒径为296-472nm，所述伴刀豆球蛋白A修饰的多孔的Pd@Au核壳纳米粒子粒径为60~70nm。

2.权利要求1所述的电化学细胞传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子和多孔的Pd@Au核壳纳米粒子的制备；

2）适配体修饰的氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子的制备；

3）伴刀豆球蛋白A修饰的多孔的Pd@Au核壳纳米粒子的制备；

4）适配体修饰的氨基化的Fe₃O₄@SiO₂核壳纳米粒子特异性结合循环肿瘤细胞，再连接伴刀豆球蛋白A修饰的多孔的Pd@Au核壳纳米粒子得到所述电化学细胞传感器。

3.根据权利要求2所述的电化学细胞传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中的适配体为氨基修饰的SYL3C适配体，所述适配体的终浓度为2~2.2μM。

4.根据权利要求2所述的电化学细胞传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中的伴刀豆球蛋白A的终浓度为0.15~0.2mM。