[发明专利]一种基于硅基多肽的生物纳米磁珠制备及其应用

权利要求书

1.一种基于硅基多肽的生物纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S10，构建细菌磁颗粒膜蛋白基因mamC或mamF的缺失突变体菌株，即一级重组菌株；

S20，构建硅基多肽和细菌磁颗粒膜蛋白MamC或者MamF的基因融合表达载体；得到的表达载体导入到一级重组菌株中，筛选表达展示硅基多肽的二级重组菌株；

S30，通过对二级重组菌株的培养发酵，生产表达展示硅基多肽的生物纳米磁珠；

S40，以展示硅基多肽的生物纳米磁珠作为种子原料，在生物纳米磁珠表面进行硅基化修饰和氧化硅沉淀，得到硅沉积或硅基化修饰的生物纳米磁珠；

所述硅基多肽为silaffins多肽；

所述silaffins多肽为YR-SiP1、YR-SiP2、YR-SiP3中的一种；

YR-SiP1的序列为：GAGAGSGAGA GSKKKKRHKK KKRHKKKKRH KKKKK；

YR-SiP2的序列为：GAGAGSGAGA GSEEEETAEE EEDAEEEEDE AKEEEEEEEE；

YR-SiP3的序列为：GAGAGSGAGA GSGAGAGSSS KKSGSYSGSK GSKRRILGAG AGSSSKKSGSYSGSKGSKRRIL。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述YR-SiP1、YR-SiP2或YR-SiP3的基因序列如下：

YR-SiP1：5’-GGTGCCGGTG CTGGTTCAGG TGCTGGTGCT GGTTCAAAGA AGAAGAAGCGGCACAAGAAG AAGAAGCGGC ACAAGAAAAA GAAGCGGCAC AAGAAGAAGA AGAAA-3’、YR-SiP2：5’-GGTGCCGGTG CTGGTTCAGG TGCTGGTGCT GGTTCAGAGG AGGAAGAAAC TGCAGAGGAA GAAGAAGATGCAGAGGAAGA AGAGGACGAG GAAGCTAAGG AGGAGGAGGA AGAGGAAGAA GAA-3’、

YR-SiP3：5’-GGTGCCGGTG CTGGTTCAGG TGCTGGTGCT GGTTCAGGTG CTGGTGCTGGTTCATCCTCT AAGAAAAGCG GCAGTTACAG CGGCTCTAAG GGCAGTAAAA GGAGGATCCT GGGTGCTGGTGCTGGTTCAT CCTCTAAGAA AAGCGGCAGT TACAGCGGCT CTAAGGGCAG TAAAAGGAGG ATCCTG-3’中的一种。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S10步骤包括：

设计两对引物分别扩增mamC或mamF基因两侧约500bp的同源DNA片段，通过分子克隆构建一条基于噬菌体病毒的微载体序列AAV-del-mamC或AAV-del-mamF；

AAV-del-mamC或AAV-del-mamF通过质粒提取及酶切步骤得到足够量的核酸序列产物，调节浓度为2mg/mL，通过电转化的方式同时转入MSR-I野生型菌株中，电转化方案：方波电脉冲，电压3100V-3200V，电脉冲时间是3.1-3.3ms，电脉冲次数是1-2次；

电转化后菌株通过蔗糖和抗生素庆大霉素梯度浓度压力筛选双交换突变菌株，经测序技术验证后，获得mamC或mamF缺失突变的重组菌株，即一级重组菌株MSRI-dC或MSRI-dF。