[发明专利]一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

1)将PTGDS过表达腺病毒转染间质干细胞，经筛选获得PTGDS过表达间质干细胞；

2)将所述步骤1)得到的PTGDS过表达间质干细胞接种至含胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行第一扩增培养，待细胞融合至70～80％时，采用无血清培养基进行第二扩增培养，48h后收集上清，离心去除漂浮活细胞，得到含外泌体上清；

3)采用蔗糖密度梯度离心法对所述步骤2)得到的含外泌体上清进行分离纯化，得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体。

2.根据权利要求1所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，所述步骤1)中，PTGDS过表达腺病毒以10⁸的滴度进行转染。

3.根据权利要求1所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，步骤2)所述含胎牛血清的低糖DMEM培养基中含质量浓度为10％的胎牛血清。

4.根据权利要求1所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，步骤2)所述离心的条件为300×g离心10min。

5.根据权利要求1所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，步骤3)所述分离纯化包括以下步骤：

a)将所述含外泌体上清在2000×g离心10min，得到去除细胞碎片的上清；

b)将所述去除细胞碎片的上清在10000×g离心30min，得到去除细胞器的上清；

c)将步骤b)得到的去除细胞器的上清进行第一浓缩，得到第一浓缩液；

d)将步骤c)得到的第一浓缩液移至1/4倍体积的蔗糖/重水密度垫，100000×g离心3h，收集底部的蔗糖/重水层，进行第二浓缩，得到第二浓缩液；

e)将所述步骤d)得到的第二浓缩液进行洗涤，过滤除菌后得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体。

6.根据权利要求5所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，所述第一浓缩和所述第二浓缩的条件独立地为：1000×g离心30 min。

7.根据权利要求5或6所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，所述第一浓缩和所述第二浓缩的截留分子量为100kDa。

8.根据权利要求5所述的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体，其特征在于，步骤d)所述洗涤采用PBS缓冲液进行，所述洗涤的次数为3次。

9.一种过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：

1)将PTGDS过表达腺病毒转染间质干细胞，经筛选获得PTGDS过表达间质干细胞；

2)将所述步骤1)得到的PTGDS过表达间质干细胞接种至含胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行第一扩增培养，待细胞融合至70～80％时，采用无血清培养基进行第二扩增培养，48h后收集上清，离心去除漂浮活细胞，得到含外泌体的上清；

3)采用蔗糖密度梯度离心法对所述步骤2)得到的含外泌体的上清进行分离纯化，得到过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体。

10.权利要求1～8任意一项所述过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体或权利要求9所述制备方法得到的过表达PTGDS基因的间质干细胞外泌体在制备预防或治疗胃癌药物中的应用。