[发明专利]一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明属于基因疫苗技术领域，具体涉及一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗，包括如下步骤，S1、设计疫苗靶点OVepis基因；S2、将S1中设计的疫苗靶点OVepis基因插入免疫载体草鱼CD74蛋白编码基因中II类分子相关肽段区的第261～280bp之间，方向从序列5’端到3’端，形成一个大小为1020bp的CD74(1‑261bp)‑Ovepis‑CD74(280‑711bp)嵌合基因，再用靶向递送载体大肠杆菌DH5α冻干菌蜕装载上述嵌合基因，即获得所述靶向表位基因疫苗；所述嵌合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。本发明有益效果是：本发明的这种口服靶向表位基因疫苗不仅能防止体内核酸酶的降解、增加疫苗DNA编码基因在黏膜局部抗原呈递细胞内的表达，又可将表达和加工处理后的抗原肽高效呈递给T、B细胞，从而大大提高所述疫苗的免疫效果。

技术领域

本发明属于基因疫苗技术领域，具体涉及一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

拟态弧菌(Vibrio mimicus)是一种严重危害水产养殖业健康发展的肠道病原菌。该菌主要经消化道黏膜感染鱼体，引起养殖鱼类腹水病。口服疫苗诱导的肠黏膜免疫应答在预防拟态弧菌引起的鱼类腹水病中发挥着至关重要的作用，也是水产养殖生产中最实用的疫苗剂型。表位基因疫苗是将保护性抗原表位基因克隆至真核表达元件下游构成的真核表达重组质粒。该疫苗进入体内后，通过宿主细胞的转录翻译系统持续表达抗原蛋白，诱导宿主产生全面且持久的免疫应答，从而达到防治传染病的目的。然而，“裸”表位基因疫苗以口服方式进入鱼体后，易受到消化道环境中核酸酶降解，同时由于基因疫苗表面带负电，也限制了其与肠黏膜局部抗原递呈细胞膜接触而内化，使其免疫原性下降，因此“裸”表位基因疫苗不能直接用于口服免疫。故亟须研发一种既能克服核酸酶降解，又能靶向局部抗原递呈细胞和促进抗原递呈的拟态弧菌靶向表位基因疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗，既能克服核酸酶降解，又能靶向局部抗原递呈细胞和促进抗原递呈。

本发明提供了一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗，包括如下步骤，

S1、构建疫苗靶点OVepis基因；

S2、将S1中设计的疫苗靶点OVepis基因插入免疫载体草鱼CD74蛋白编码基因中II类分子相关肽段区的第261～280bp之间，方向从序列5’端到3’端，形成一个大小为1020bp的CD74(1-261bp)-Ovepis-CD74(280-711bp)嵌合基因，再用靶向递送载体大肠杆菌DH5α冻干菌蜕装载上述嵌合基因，即获得所述靶向表位基因疫苗；

所述嵌合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。

优选的，所述S1中，构建疫苗靶点OVepis基因的具体方法如下：使用具有接头肽“丙氨酸-丙氨酸-酪氨酸”的核苷酸序列SEQ ID NO:8、具有接头肽“甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸-丝氨酸”的核苷酸序列SEQ ID NO:9以及具有接头肽“甘氨酸-脯氨酸-甘氨酸”的核苷酸序列SEQ ID NO:10，将拟态弧菌黏附素蛋白OmpU的2个B细胞线性表位的核苷酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，拟态弧菌溶血素蛋白VMH的3个B细胞线性表位的核苷酸序列SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和拟态弧菌溶血素蛋白VMH的2个模拟表位的核苷酸序列SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7按照SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:8-SEQ ID NO:2-SEQ ID NO:8-SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:8-SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8-SEQ ID NO:5-SEQID NO:9-SEQ ID NO:6-SEQ ID NO:10-SEQ ID NO:7顺序串联起来，构建成一个大小为327bp的基因，该基因即为疫苗靶点OVepis基因，其核苷酸序列以及对应的氨基酸序列如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示；