[发明专利]一种人胚胎体外培养液及培养系统

说明书

本发明提供了一种人胚胎体外培养液及其制备方法，属于人类辅助生殖领域。所述培养液主要包括：硫酸庆大霉素0.01～0.05g/L，酚红0.005～0.01g/L，乙二胺四乙酸二钠0～0.01mM/L，氯化钠90～116mM/L，氯化钾2.5～10.0mM/L，二水氯化钙0～1.8mM/L，磷酸二氢钾0～7.16mM/L，二水硫酸镁0.2～1.51M/L，碳酸氢钠20～25mM/L，丙酮酸钠0.1～7.27mM/L，乳酸钠0～20mM/L，葡萄糖0～3.25mM/L，柠檬酸钠0～1.0mM/L，丙胺酰谷氨酰胺0～1.0mM/L，肌醇0～2.7mM/L，牛磺酸0.05～5mM/L，人血清蛋白5g/L，以及必需氨基酸和非必需氨基酸。

技术领域

本发明属于人类辅助生殖领域，具体涉及一种胚胎细胞体外培养技术，包括一种能支持人类早期胚胎发育至囊胚的培养液及其培养装置的培养系统。

背景技术

人类第一例体外受精(IVF)婴儿诞生于1978年，从此辅助生殖蓬勃发展，相继诞生卵子单精子注射(ICSI)，植入前遗传学诊断(PGD)，卵子或胚胎冻存等技术，极大地促进了辅助生殖业的发展。

胚胎培养液为植入前胚胎提供了发育所需营养，为临床所需特定时期胚胎移植(ET)或进行植入前遗传学诊断(PGD)等操作提供了体外环境，是辅助生殖领域临床或实验研究中不可或缺的试剂。目前国内的培养系统普遍存在以下缺陷：(1)多采用序贯培养液，培养过程需中途换液；(2)国内大部分采购进口试剂，价格高采购周期长；(3)培养全过程胚胎皿底平放，无支撑胚胎生长发育的微环境；为此，必需有一套新的培养系统解决上述问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于人胚胎细胞体外培养的一贯式培养液，所述培养液包括以下成分：抑菌成份硫酸庆大霉素0.01～0.05g/L；pH指示剂酚红0.005～0.01g/L；离子螯合剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA)0～0.01mM/L；营养成份氯化钠90～116mM/L，氯化钾2.5～10.0mM/L，二水氯化钙0～1.8mM/L，磷酸二氢钾0～7.16mM/L，二水硫酸镁0.2～1.51M/L，碳酸氢钠20～25mM/L，丙酮酸钠0.1～7.27mM/L，乳酸钠0～20mM/L，葡萄糖0～3.25mM/L，柠檬酸钠0～1.0mM/L，丙胺酰谷氨酰胺0～1.0mM/L，肌醇0～2.7mM/L，牛磺酸0.05～5mM/L，人血清蛋白5g/L，必需氨基酸1.43～3.11％(m/m)，非必需氨基酸0.37～0.72％(m/m)。

其中，本发明所述必需氨基酸为选自L-精氨酸，L-胱氨酸，L-组氨酸，L-异亮氨酸，L-亮氨酸，L-赖氨酸，L-甲硫氨酸，L-苯丙氨酸，L-苏氨酸，L-色氨酸，L-酪氨酸，L-缬氨酸的一种或几种。

其中，本发明所述的非必需氨基酸为选自L-丙氨酸，L-天冬氨酸，L-天门氨酸，L-谷氨酸，L-甘氨酸，L-脯氨酸，L-丝氨酸的一种或几种。

本发明所述的培养液，其配制所用的溶剂为超纯水，其pH值为7.3±0.1，渗透压为257～273mOsm/kg。

本发明的另一个目的是提供一种制备所述人胚胎细胞体外培养液的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)以超纯水为溶剂，分别按比例加入本发明所述的氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、二水氯化钙、二水硫酸镁、乙二胺四乙酸二钠，必需氨基酸和非必需氨基酸、葡萄糖、肌醇、柠檬酸钠、牛磺酸、丙酮酸钠、乳酸钠配成基础液A；

(2)向基础液A中按比例加入本发明所述的硫酸庆大霉素、酚红，最后加入碳酸氢钠，配成基础液B；

(3)上述基础液B放入5％二氧化碳，5％氧气及90％氮气的培养箱内平衡过夜后在超净台内用真空过滤泵经0.2μm过滤膜过滤得到原液；

(4)调节上述原液pH值7.3±0.1，渗透压257～273mOsm/kg，加入人血清白蛋白并混匀，在超净台内分装、封口，包装后得到成品，并4℃保存。