[发明专利]一种肺炎多糖疫苗水解液中戊糖、己糖、氨基糖和糖醛酸的含量测定方法

权利要求书

1.一种肺炎多糖疫苗水解液中戊糖、己糖、氨基糖和糖醛酸的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)单一标准母液配制：分别称取适量葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、氨基鼠李糖、氨基葡萄糖、2-氨基-5羧基葡萄糖、2-氨基果糖、2,4-二氨基鼠李糖和羧基醚葡萄糖对照品，用乙腈和水混合液溶解，其中以体积比计，乙腈：水＝50:50，配制成浓度为1mg/mL的母液备用；

(2)单一标准工作溶液的配制：用体积比为50:50的乙腈-水混合液稀释上述母液到3.9-1000μg/L浓度范围，得到标准工作溶液，标准工作溶液浓度点分别为1000，500，250，125，62.6，31.3，15.6，7.8，3.9μg/L；

(3)绘制标准工作曲线：将上述标准工作溶液用高效液相色谱串联质谱进行分析，即可得到上述对照品的色谱图，根据溶液浓度与对应色谱峰面积的关系得到标准工作曲线；

(4)样品检测：取肺炎多糖疫苗水解液用高效液相色谱串联质谱进行分析检测，根据待测组分的响应峰面积和标准工作曲线，得出水解液中戊糖、己糖、氨基糖和糖醛酸的含量；

所述氨基糖包括氨基戊糖、氨基己糖、2,4-二氨基戊糖、2-氨基-5-羧基己糖、2-氨基果糖；所述糖醛酸包括己糖酸和羧基醚己糖；

步骤(3)和步骤(4)所述高效液相色谱的检测条件为：

固定相：为亲水固定相；

柱温：30℃；

流动相：A-含离子交换剂的有机溶剂水溶液；B-离子交换剂水溶液；

梯度：0～10min，100％A-0％A；

流速：0.2～0.5mL/min；

进样体积：10μL；

所述亲水固定相为固定相1、固定相2或固定相3；

固定相1为一种亲水作用-阴阳离子交换混合模式固定相，其结构式如下：

所述固定相2为一种亲水作用模式固定相，其结构式如下：

所述固定相3为一种亲水作用模式固定相，其结构式如下：

其中R1，R2，R3为硅胶或聚苯乙烯；

所述有机溶剂为与水相溶的有机溶剂，包括甲醇、乙腈和乙醇；有机溶剂与水的体积比为60～100：0～40；

所述离子交换剂为质谱兼容的酸或盐，或酸和盐的混合物；

所述盐为甲酸铵或乙酸铵，所述酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸；

所述流动相A中离子交换剂在有机水溶液中的浓度为0～20mmol/L，流动相B中离子交换剂水溶液的浓度为：0～20mmol/L；

步骤(3)和步骤(4)所述质谱的检测条件为：

质谱仪：三重四级杆质谱仪；离子源：ES+模式和ES-模式；雾化器流速：3L/min；加热器流速：10L/min；接口温度：200℃；DL温度：230℃；加热模块温度：400℃；干燥气流速：10L/min；接口电压：3kV；质谱检测器检测模式为多离子选择监控。