[发明专利]一种芽孢杆菌的流加补料发酵方法

权利要求书

1.一种芽孢杆菌的流加补料发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)一级种子制备：取芽孢杆菌菌种悬浊液接种于一级种子培养基中，然后进行培养；

(2)二级种子制备：将一级种子接种于二级种子培养基中，然后进行培养；

(3)发酵：将二级种子接种于发酵培养基中，然后进行发酵培养；

当发酵至8-10h时流加补料培养基A，发酵至12-16h时流加补料培养基B；

所述补料培养基A包含质量百分比5％-15％的碳源；

所述补料培养基B包含质量百分比5％-10％的碳源和质量百分比2.1％-11％发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸；

所述补料培养基A和补料培养基B的流加量均为发酵培养基体积的0.1-1.0‰；所述碳源为葡萄糖，所述发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸为甘氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苏氨酸、脯氨酸和酪氨酸；

所述补料培养基A的的原料及用量为：葡萄糖5％-15％，培养基pH为6.5-7.5；

所述补料培养基B的原料及用量为：葡萄糖5％-10％，甘氨酸1.0％-4.0％，蛋氨酸0.5％-2.0％，色氨酸0.5％-2.0％，苏氨酸0.1％-1.0％，脯氨酸0.0％-1.0％，酪氨酸0.0％-1.0％，培养基pH为6.2-7.5；

所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌；所述芽孢杆菌能够降解呕吐毒素。

2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述一级种子培养基包括的原料为：每1000mL，包括胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化钠3-6g、磷酸氢二钠2.5-4g、七水硫酸镁0.5-1.5g，蒸馏水1000mL，pH为7.0-7.4。

3.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述二级种子培养基的原料按质量百分比为：葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-5％，磷酸氢二钾0.02％-0.05％，氯化钠0.5％-1％，硫酸镁0.02％-0.1％，培养基pH为6.5-7.5。

4.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的原料按质量百分比为：葡萄糖0.5％-3.0％，豆粕1％-4％，玉米浆1％-3％，酵母粉1％-3％，蛋白胨1％-3％，磷酸氢二钾0.01％-0.05％，硫酸镁0.1％-0.2％，硫酸锰0.002％，培养基pH为6.5-7.5。

5.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述芽孢杆菌菌种悬浊液浓度为1×10¹⁰-2×10¹¹cfu/mL，将芽孢杆菌菌种悬浊液按照体积百分比1％-5％接种于一级种子培养基中；

将含有一级种子的一级种子培养基按照体积百分比1％-5％接种于二级种子培养基中；

将含有二级种子的二级种子培养基按照体积百分比1％-5％接种于发酵培养基中。

6.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养条件为：温度37℃-40℃，时间16-24h，转速180-200r/min；

步骤(2)中所述培养条件为：温度30℃-37℃，时间8-10h，转速180-200r/min；

步骤(3)中所述发酵培养条件为：发酵温度为30℃-37℃，时间24-36h，发酵罐罐压为0.02Mpa-0.05Mpa，转速180-200r/min。

7.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基装入量为发酵罐有效容积的50％-70％。