[发明专利]利用抗病基因识别无毒效应蛋白以鉴定具有分泌功能信号肽的方法

权利要求书

1.一种利用抗病基因识别无毒效应蛋白以鉴定具有分泌功能的信号肽的方法，其特征在于，所述抗病基因能够在细胞内识别无毒效应蛋白，包括以下步骤：

（1）将待鉴定信号肽连接无毒效应蛋白C端构建表达载体；

（2）将步骤（1）构建的表达载体转化感受态细胞；

（3）将步骤（2）的感受态细胞和含有抗病基因的感受态细胞共同注射入植物细胞中，观察注射位点坏死情况，若注射位点坏死，则待检测信号肽不具有分泌功能，若注射位点无坏死，则待检测信号肽具有分泌功能；

所述抗病基因为R3a，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述无毒效应蛋白为致病疫霉无毒效应蛋白Avr3a，其C端核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述表达载体为植物瞬时表达载体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述感受态细胞为农杆菌感受态。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述植物为烟草、马铃薯、番茄或辣椒。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括设立阳性对照，所述阳性对照是在步骤（1）阶段，将大豆疫霉无毒效应蛋白Avr1b的信号肽连接无毒效应蛋白C端构建表达载体得到，所述Avr1b的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，阳性对照为将氨基酸序列如SEQ ID NO.4所述的Avr1b的信号肽连接氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的致病疫霉无毒效应蛋白Avr3a C端构建植物瞬时表达载体得到。

7.权利要求1-6任一所述的方法在筛选具有分泌功能的信号肽中的应用。

8.权利要求1-6任一所述的方法在制备转基因植物中的应用。