[发明专利]EGFR基因突变检测引物组、探针、试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201810053318.4 | 申请日： | 2018-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN109385463A | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 盛司潼;周璐;刘程捷;万培星;李建军;童灿 | 申请（专利权）人： | 武汉康昕瑞基因健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430040 湖北省武汉市东湖新技术*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变检测引物 特异性探针 上游引物 探针 特异性引物 末端连接 下游引物 分子生物学领域 人工错配碱基 荧光报告基团 荧光淬灭基团 核酸片段 基因工程 试剂盒 检测 扩增 位点 引物 | ||
1.一种EGFR基因突变检测引物及探针，用于扩增和检测含T790M位点的核酸片段，所述引物包括特异性引物和特异性探针，特异性引物包括上游引物和下游引物；
所述上游引物为SEQ ID NO:1，所述下游引物为SEQ ID NO:2，所述特异性探针为SEQID NO:3，所述特异性探针的5’末端连接荧光报告基团，3’末端连接荧光淬灭基团，所述上游引物的3’端第二位包括人工错配碱基A。
2.根据权利要求1所述的EGFR基因突变检测引物及探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为BHQ1。
3.根据权利要求1所述的EGFR基因突变检测引物及探针，其特征在于，进一步包括内控引物和内控探针，所述内控引物包括内控上引物和内控下引物；
所述内控上引物为SEQ ID NO:4，所述内控下引物为SEQ ID NO:5，所述内控探针为SEQID NO:6。
4.一种EGFR基因突变检测特异性引物及特异性探针，用于扩增和检测含T790M位点的核酸片段，所述引物包括特异性引物和特异性探针，特异性引物包括上游引物和下游引物；
所述上游引物为SEQ ID NO:7，所述下游引物为SEQ ID NO:8，所述特异性探针为SEQID NO:9，所述特异性探针的5’末端连接荧光报告基团，3’末端连接荧光淬灭基团，所述上游引物的3’端第二位和第三位包括人工错配碱基AA。
5.根据权利要求4所述的EGFR基因突变检测引物及探针，其特征在于，进一步包括内控引物和内控探针，所述内控引物包括内控上引物和内控下引物；
所述内控上引物为SEQ ID NO:4，所述内控下引物为SEQ ID NO:5，所述内控探针为SEQID NO:6。
6.一种EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1至5任意一项所述的EGFR基因突变检测引物及探针。
7.根据权利要求6所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液；dNTP混合液；DNA聚合酶；Mg2+。
8.根据权利要求7所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为热启动DNA聚合酶。
9.根据权利要求8所述的EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述热启动DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶或UNG酶。
10.一种EGFR基因突变检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
A、利用权利要求3或5所述的EGFR基因突变检测引物、探针对含待测位点的核酸片段进行单管实时荧光PCR扩增；
B、获取特异性探针的荧光值CtFAM以及内控探针的荧光值CtVIC，计算二者差值△Ct=CtFAM-CtVIC用于判断检测结果，当△Ct小于10表示含待测位点的核酸片段具有EGFR基因T790M突变，否则表示含待测位点的核酸片段没有EGFR基因T790M突变。
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