[发明专利]表达CD40L的哺乳动物细胞及其用途

权利要求书

1.用于产生抗体的方法，其包括在存在IL-2和IL-21以及IL-6的情况下共培养人B-细胞与表达人CD40L的哺乳动物细胞BHK或CHO细胞的步骤，其中IL-4不存在于所述培养中。

2.权利要求1的方法，其特征在于所述B-细胞是非成熟的B-细胞。

3.权利要求1的方法，其特征在于所述人B-细胞是单个放置的B-细胞。

4.权利要求1-3任一项的方法，其特征在于所述人B-细胞是IgG阳性的B-细胞（IgG⁺ B-细胞）。

5.IL-2和IL-21和IL-6用于在IL-4不存在的情况下共培养人B-细胞与饲养细胞的用途，其中所述饲养细胞是表达人CD40L的哺乳动物细胞BHK或CHO细胞。

6.权利要求5的用途，其特征在于所述饲养细胞是表达人CD40L的BHK细胞。

7.用于培养分泌特异性结合T-细胞表面抗原并且介导阴性刺激物至T-细胞的抗体的人B-细胞的方法，其包括在存在IL-2和IL-21和IL-6且不存在IL-4的情况下共培养人B-细胞和表达人CD40L的哺乳动物细胞BHK或CHO细胞。

8.用于产生特异性结合抗原的抗体的方法，其包括以下步骤：

a）在存在IL-2和IL-21和IL-6且不存在IL-4的情况下共培养分泌抗体的人B-细胞的集合或单个分泌抗体的人B-细胞与表达人CD40L的哺乳动物细胞BHK或CHO细胞，

b）培养包含在一个或多个表达盒内含有编码步骤a）中共培养的人B-细胞分泌的抗体可变区或其变体的核酸的细胞，

c）从细胞或培养基中回收抗体，并由此产生抗体，其特异性结合抗原。

9.权利要求8的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

a）提供分泌抗体的人B-细胞群体，

b）用至少一种荧光染料染色人B-细胞群体的细胞，

c）将B-细胞染色群体的单个细胞放置在单独的容器中，

d）在存在表达人CD40L的哺乳动物细胞BHK或CHO细胞和IL-2和IL21和IL-6且不存在IL-4的情况下培养放置的各人B-细胞，

e）测定在各人B-细胞的培养中分泌的抗体的结合特异性，

f）通过逆转录酶PCR和核苷酸测序测定特异性结合的抗体的可变轻链和重链结构域的氨基酸序列，并由此获得单克隆抗体可变轻链和重链结构域的编码核酸，

g）在表达盒中引入单克隆抗体轻链和重链可变域编码核酸用于表达抗体，

h）在细胞中引入核酸，

i）培养细胞并从细胞或细胞培养上清液中回收抗体，并由此产生抗体，其特异性结合抗原。

10.权利要求9的方法，其特征在于，所述染色使用1-3种或2-3种荧光染料进行；将B-细胞染色群体的单个细胞分别放置在多孔平板的一个孔中。

11.权利要求9的方法，其特征在于，步骤(a)中的分泌抗体的人B-细胞群体为分泌抗体的成熟人B-细胞。

12.表达人CD40L的哺乳动物细胞BHK细胞、IL-2、IL-21和IL-6在共培养分泌抗体的人B-细胞中的用途，其中所述应用在不存在IL-4的情况下进行。

13.表达人CD40L的哺乳动物细胞CHO细胞、IL-2、IL-21和IL-6在共培养分泌抗体的人B-细胞中的用途，其中所述应用在不存在IL-4的情况下进行。