[发明专利]一种核酸提取方法

说明书

本发明公开了一种核酸提取方法，包括以下步骤：S1、取核酸样品加裂解液A，于30～50℃搅拌，温度升至50～70℃，加入裂解液B继续搅拌，得混合液A；S2、将带有磁珠的磁棒置于混合液A中，搅拌；S3、将磁棒升起，弃去反应器中的液体，再向反应器中加入清洗剂，然后将磁棒恢复原位，再进行搅拌，重复升起磁棒、弃去液体、加清洗剂、恢复磁棒、搅拌的操作2～3次，再将磁棒升起，弃去反应器中的液体，向反应器中加入洗脱剂，进行核酸的洗脱；S4、核酸的预处理。本发明提出的提取方法，操作简单，核酸样品的裂解完全，核酸与裂解物的分离效果好，提取效率高，提取的核酸纯度高，完整度高，对后续检测无影响。

技术领域

本发明涉及生物科学领域，尤其涉及一种核酸提取方法。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用，比如起着携带和转移活化氨基酸的作用的转运核糖核酸(tRNA)，作为合成蛋白质的模板的信使核糖核酸(mRNA)，作为细胞合成蛋白质的主要场所的核糖体的核糖核酸(rRNA)。无论是DNA还是RNA都对生物科学的研究和发展具有重要作用，因此如何从样品中将核酸提取出来并整合成易于使用和检测的形式是研究核酸的前提和基础。目前对核酸的提取方法主要有化学方法和物理方法，但化学方法溶剂的使用量大，且对后续的核酸检测具有干扰，因此实验室研究主要采取物理提取法。物理提取核酸的方法主要有超声法、提取柱法、磁珠提取法，但普遍存在操作复杂，提取效率低，处理后核酸样品的完整度差的问题。基于此，本发明提出一种核酸提取方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种核酸提取方法。

一种核酸提取方法，包括以下步骤：

S1、样品的裂解：取核酸样品置于反应器中，向反应器中加入裂解液A，开启搅拌套，于30～50℃，搅拌10～20min，再将反应器的温度升至50～70℃，向反应器中加入裂解液B，继续搅拌10～20min，得混合液A；

S2、磁珠的吸附：将带有磁珠的磁棒置于装有混合液A的反应器中，在搅拌套的搅拌作用下混合物A中的核酸吸附在磁棒上；

S3、清洗和洗脱：将磁棒升起，弃去反应器中的液体，再向反应器中加入清洗剂，然后将磁棒恢复原位，再进行搅拌，重复升起磁棒、弃去液体、加清洗剂、恢复磁棒、搅拌的操作2～3次，再将磁棒升起，弃去反应器中的液体，向反应器中加入洗脱剂，进行核酸的洗脱；

S4、核酸的预处理：将洗脱后的核酸进行末端修复、3’末端加A、接头连接、亚硫酸氢盐处理、PCR扩增，然后进行上机测试，完成核酸的提取。

优选的，所述裂解液A为7.5mol/L的盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素或二硫苏糖醇中任意一种的水溶液，且裂解液A的质量浓度为40％～45％，所述裂解液A的加入量为样品质量的10～12倍。

优选的，所述裂解液B为蛋白酶K、Tris-HCl溶液和水的混合物，所述裂解液B中蛋白酶K的质量浓度为8％～12％，所述Tris-HCl溶液的pH值为7.5、浓度为50mmol/L，所述裂解液B的加入量为样品质量的6～7倍。

优选的，所述裂解液A与核酸样品的反应温度为35～45℃。

优选的，所述裂解液B与核酸样品的反应温度为55～65℃。

优选的，所述磁珠为以超顺磁性氧化铁为核心外部包覆二氧化硅的微球，根据需要还可以在微球外包覆氨基或羧基达到特异性要求。