[发明专利]一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法

说明书

本发明公开了一种检测门冬氨酸鸟氨酸中特定杂质的分析方法，属于分析化学领域；该方法采用HPLC方法进行检测，采用ProntoSIL‑Amino（德国Bischoff）氨基柱，检测波长：210‑220nm，流速：0.8‑1.2ml/min，柱温：25‑35℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾‑甲醇为流动相，采用梯度洗脱程序进行分析，本技术方案可以迅速、准确对（β‑门冬氨酸）‑（δ‑鸟氨酸）以及（β‑门冬氨酸）‑鸟氨酸进行定性和定量分析，且分离度好，检测限和定量限都较低，线性范围较宽，回收率范围在标准规定的范围内，所以该方法灵敏，能够准确计算出（β‑门冬氨酸）‑（δ‑鸟氨酸）以及（β‑门冬氨酸）‑鸟氨酸的含量，为门冬氨酸鸟氨酸中杂质的进一步监测、研究提供了技术支持。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种使用HPLC法分析检测门冬氨酸鸟氨酸中含有的(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸杂质的分析方法。

背景技术

门冬氨酸鸟氨酸，化学名称：(S)-2，5-二氨基戊酸-(S)-2-氨基丁二酸盐；是L-天门冬氨酸与L-鸟氨酸经过化学反应而形成的盐，溶于水后以离子的形式存在，进入体内后分解为门冬氨酸和鸟氨酸，能直接参与肝细胞代谢，并能激活肝脏解毒功能中的两个关键酶，因而能够协助清除对人体有害的自由基，增强肝脏的排毒功能，迅速降低过高的血氨，促进肝细胞自身的修复和再生，从而有效地改善肝功能，恢复机体能量平衡。

目前门冬氨酸鸟氨酸的制剂形式有颗粒剂和注射剂两种，本实验室技术人员在研究门冬氨酸鸟氨酸原料和制剂长期稳定性实验的过程中发现：在距离生产时间15-20个月后产生了两种杂质：(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸，该两种杂质为门冬氨酸鸟氨酸在储存过程中发生氨基和羧基的相互缩合或者由于自身降解而生成，由于以上两种杂质的存在，可能引起人体不良反应及药物刺激性，所以其含量多少直接影响门冬氨酸鸟氨酸或其制剂的质量，也决定了药品的保质期长短。

现有技术中关于门冬氨酸鸟氨酸中杂质的检测方法中没有公开相关(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的信息，如CN104807924A中提供了一种检测门冬氨酸鸟氨酸中富马酸、精氨酸、尿素、丁二酸、苹果酸、内酰胺的高效液相分析检测方法；CN102288687A提供了一种检测鸟氨酰胺的检测方法；覃婷婷等在《天津药学》杂志中采用柱后衍生化高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸颗粒剂的有关物质及含量，其中有关物质为：鸟氨酸内酰胺、赖氨酸、Ω-二鸟氨酸；所以目前现有技术中的门冬氨酸鸟氨酸中没有公开相关(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸，更没有公开两种杂质的分析方法，且现有的门冬氨酸鸟氨酸及其制剂的药品质量标准中也没有明确收录有关以上杂质的定量和定性的方法，所以为进一步研究门冬氨酸和鸟氨酸的质量标准，本申请主要针对两种杂质的定性和定量方法进行研究。

发明内容

为克服现有技术中没有公开门冬氨酸鸟氨酸原料和制剂中(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)和(β-门冬氨酸)-鸟氨酸的两种杂质的检测方法，本申请采用如下技术方案：

一种检测门冬氨酸鸟氨酸特定杂质的分析方法，采用高效液相色谱仪测定，色谱条件为：

色谱柱：ProntoSIL-Amino(德国Bischoff)氨基柱；

检测波长：210-220nm；流速：0.8-1.2ml/min；柱温：25-35℃；

流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾-甲醇，体积比35-45：55-65；

流动相B：0.1mol/L碳酸二氢钾缓冲液-甲醇，体积比为55-65：35-45；

采用梯度洗脱程序：

以上的特定杂质为(β-门冬氨酸)-(δ-鸟氨酸)、(β-门冬氨酸)-鸟氨酸中的一种或两种；