[发明专利]一种ABCG2基因多态性检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种ABCG2基因多态性检测试剂盒，所述检测试剂盒包括：底物、检测液、酶系混合液、特异性引物、三磷酸腺苷双磷酸酶和检测板，检测板上设有若干检测样孔，检测液预先封存在检测样孔中，酶系混合液包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶及荧光素酶，特异性引物为待测单链的特异性退火引物，所述SNP位点的待测序列包含在如序列表SEQ ID NO:1所示的序列中，测序的退火引物序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明中的ABCG2基因多态性检测试剂盒可以适用于市面上所有已出现或在研究中的SNP位点及所有的特异性引物，可以根据需要随时调整试剂盒的检测内容及数量，可操作性强，有大规模的推广价值。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，尤其涉及单核苷酸多态性的检测系统，具体是指一种ABCG2基因多态性检测试剂盒。

背景技术

SNP单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)的检测技术可分为两个时代，一为凝胶时代，二为高通量时代。凝胶时代的主要技术和方法包括限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)、寡核苷酸连接分析(OLA)、等位基因特异聚合酶链反应分析(AS2PCR)、单链构象多态性分析(SSCP)、变性梯度凝胶电泳分析(DGGE)，虽然这些技术与高通量时代的技术原理大致一样，但是由于它不能进行自动化，只能进行小规模的SNP分型测试，所以必然会被淘汰。高通量时代的SNP分型技术按其技术原理可分为:特异位点杂交(ASH)、特异位点引物延伸(ASPE)、单碱基延伸(SBCE)、特异位点切割(ASC)和特异位点连接(ASL)5种方法。这些技术虽在某种程度上能完成对SNP的检测，但由于它们必须通过凝胶电泳进行检测，因此，距快速、高效、自动化的目标还相差甚远。传统的RFLP只能检测到SNP的一部分，测序技术既费时费力，又不易实现自动化，而且DNA链的二级结构还容易造成人工假相，使测序结果出现偏差，不适宜于SNP的检测；SSCP则很难满足自动化的需要，难以大规模开展工作。因此，这些方法均未被广泛采用。现有的SNP检测有如下方法：

探针法，其中TaqMan探针法的原理为针对一个SNP位点的两种基因型分别设计两条TaqMan探针，两条探针的5’端分别标记两种不同的荧光基团(如FAM和VIC)，3’端都标记一个淬灭荧光基团。PCR扩增过程中，TaqMan探针与对应产物模板在退火时杂交形成适合于核酸外切酶活性的底物，导致探针5’端荧光基团修饰的碱基被切割下来，从而释放荧光信号，所以PCR过程中荧光信号的出现特异指示SNP位点的基因型。探针法还包括一种改进的双杂交探针法，即FRET探针法，其主要特点是针对一个SNP位点设计一对相邻杂交的探针，其中一条探针杂交于SNP位点之上，两条荧光标记探针因荧光能量共振转移原理实现荧光检测，应用这一方法时需要对明确SNP位点信息，针对其特定的序列设计并合成特异性探针。探针法的准确性高，适合于大样本、少位点的检测，但是价格比较贵，合成探针的成本比较高，如果只是做少量样本则探针法性价比很低。

SNPshot法为基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序法，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶，四种荧光标记的ddNTP，紧挨多态位点5’端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪电泳后，根据峰的颜色可知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型，根据峰移动的胶位置确定该延伸产物对应的SNP位点。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于5--30个SNP位点分析。但SNPshot法所采用的所有试剂及仪器均为进口产品，因此检测成本很高。