[发明专利]赤霉酸种子液的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于赤霉酸制备技术领域，尤其涉及一种赤霉酸种子液的制备方法。

背景技术

赤霉酸是通过一种赤霉菌发酵培养代谢得到的一类次级代谢产物，被分离、鉴定和命名的一种有116种，其中在农业中应用最广泛的就是GA₃，在我国农业生产中发挥着巨大的作用。

GA₃具有非常高的植物调节活性，对各种农作物的生长和发育都有很明显的调节作用。在北方，GA₃主要应用于葡萄、红枣、山楂、油桃等经济作物上，在花期喷洒一定浓度赤霉酸溶液可以有效提高果树的坐果率，促进果实生长发育，果树产量提高20％～30％左右。在南方，赤霉酸主要应用于杂交水稻制种上，调节水稻父母本在同一时间开花，使母本授粉率大幅提高，进一步提高了杂交水稻种子的产量，降低了种子的生产成本，为农民减轻了负担。

目前赤霉酸发酵行业的通用种子培养基主要为以下组分：葡萄糖0.5％，可溶性淀粉3％，花生饼粉0.3％，黄豆饼粉0.5％，MgSO4·7H₂O 0.1％，KH₂PO₄0.1％，pH自然。按照以下制备方法制备：从GA3保藏菌种斜面取1～2环菌种接至种子摇瓶中，震荡培养；然后将GA₃菌种接种到种子罐中进行培养，得到悬浮液；再将得到的悬浮液继续在种子罐内培养，最后接种到发酵罐内进行发酵，得到发酵液。但GA₃菌种需多次活化，使菌种的遗传稳定性面临更多的考验，大规模生产不同批次的产酸水平可能存在较大的差异性。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种赤霉酸种子液的制备方法，该制备方法无需经斜面活化的过程。

本发明提供了一种赤霉酸种子液的制备方法，包括：

S1)将冷冻保藏的GA₃菌种接入至种子培养基中进行摇瓶培养，得到悬浮液；所述种子培养基包括5～15g/L第一有机氮源、5～15g/L第一小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇；

S2)将所述悬浮液转入种子罐中进行发酵培养，得到种子液；所述种子罐的培养基包括5～15g/L第二有机氮源、5～15g/L第二小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。

优选的，所述步骤S2)还包括：

发酵培养后，转入二级种子罐中继续发酵培养，得到种子液；所述二级种子罐的培养基包括5～15g/L第三有机氮源、5～15g/L第三小分子有机碳源、1～5g/L磷酸二氢钾、0.1～1g/L硫酸镁与0.1～1g/L聚丙二醇。

优选的，所述第一有机氮源、第二有机氮源与第三有机氮源各自独立地选自大豆蛋白、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉与鱼粉中的一种或多种。

优选的，所述第一小分子有机碳源、第二小分子有机碳源与第三小分子有机碳源各自独立地选自蔗糖、葡萄糖、糖蜜、淀粉糊精、甘露糖与半乳糖中的一种或多种。

优选的，所述步骤S1)中摇瓶培养的温度为28℃～30℃；摇瓶培养的时间为60～80h。

优选的，所述步骤S2)中发酵培养的温度为28℃～30℃；发酵培养的时间为48～72h；发酵培养的压力为0.01～0.05MPa；所述发酵培养的空气流量为60～70Nm³/h。

优选的，所述步骤S2)中继续发酵培养的温度为28℃～30℃；继续发酵培养的时间为15～25h；继续发酵培养的压力为0.01～0.05MPa；所述继续发酵培养的空气流量为600～800Nm³/h。

优选的，所述种子培养基包括10g/L第一有机氮源、10g/L第一小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇；

所述种子罐的培养基包括10g/L第二有机氮源、10g/L第二小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇；

所述二级种子罐的培养基包括10g/L第三有机氮源、10g/L第三小分子有机碳源、3g/L磷酸二氢钾、0.6g/L硫酸镁与0.5g/L聚丙二醇。

优选的，所述种子罐的培养基与二级种子罐的培养基的pH值各自独立地为4.5～5.5。