[发明专利]一种青蛤免疫调节多肽的制备方法

说明书

一种青蛤免疫调节多肽的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：a）将青蛤肉清洗、用捣碎机将青蛤肉捣碎制成浆料；b）酶解：选用蛋白酶对青蛤肉浆料进行酶解，制成酶解液；c）超滤：将酶解液加入超滤系统，用10KD、5KD、3KD的超滤膜进行超滤，收集>10KD、10‑5KD、5‑3KD和<3KD分子量的酶解液；d）将酶解液用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析和缓冲液洗脱，分别收集各峰后，取有生物活性的峰再用反相高效液相色谱(RT‑HPLC)纯化；e）经过反相高效液相色谱(RT‑HPLC)纯化及氨基酸序列检测，获得青蛤免疫调节多肽产品。

技术领域

本发明涉及的是一种青蛤免疫调节多肽的制备方法，属于生物制品技术领域。

背景技术

生物活性肽是一类特异性蛋白片段，通常含有2到20个氨基酸残基并对人体健康有着积极的影响。近年来研究表明，生物活性肽在抗高血压、抗肿瘤、免疫调节、抗菌等方面具有重要的潜在价值。

青蛤（Cyclina sinensis）俗称铁蛤、蛤蜊，软体动物门，瓣鳃纲，真瓣鳃目，帘蛤科，青蛤属，是我国南北习见的经济贝类。青蛤在民间入药具有悠久的历史。ChangXingJ等从青蛤中提取的多糖具有抗氧化和潜在的护肝作用；闫海强等从青蛤中提取的多肽具有对前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖的抑制作用。刘翠等用青蛤提取液分别对成年小鼠和老年小鼠进行注射后，发现其能显著增加衰老小鼠体内淋巴细胞数量，具有调节小鼠免疫功能的作用。但目前还没有一种从青蛤肉中提取具有免疫调节作用活性多肽的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种制备工艺简单，制备效率高，有生物活动作用的青蛤免疫调节多肽的制备方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种青蛤免疫调节多肽的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

a）将青蛤肉清洗、用捣碎机将青蛤肉捣碎制成浆料；

b）酶解：选用蛋白酶对青蛤肉浆料进行酶解，制成酶解液；

c）超滤：将酶解液加入超滤系统，用10KD、5KD、3KD的超滤膜进行超滤，收集&gt;10KD、10-5KD、5-3KD和&lt;3KD分子量的酶解液；

d）将酶解液用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析和缓冲液洗脱，分别收集各峰后，取有生物活性的峰再用反相高效液相色谱(RT- HPLC)纯化；

e）经过反相高效液相色谱(RT- HPLC)纯化及氨基酸序列检测，获得青蛤免疫调节多肽产品，其青蛤活性多肽的氨基酸序列为Arg-Val-Ala-Pro-Glu-Glu-His-Pro-Val-Glu-Gly-Arg-Tyr-Leu-Val，分子量为1751.3 Da。

作为优选：所述的步骤b）中，蛋白酶为胃蛋白酶，最佳酶解温度为42℃、pH值为2、料液比为1:10 (g/mL)、时间为8 h、加酶量为1600 (u/g)；

所述的步骤d）中，所述的凝胶柱层析和缓冲液洗脱是：PH8.5Tris-HC1 缓冲液，0 ～0.03mol/NaCl 梯度洗脱，收集有活性的各峰，冻干后，凝胶柱脱盐；