[发明专利]高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，包括蜂胶样液制备工序，蜂胶样液制备工序包括如下步骤：取蜂胶样品和D5‑氯霉素标准品内标充分混合，然后静置，再加入有机溶剂进行涡旋，使蜂胶样品充分溶解；然后加入氢氧化碱溶液进行涡旋和离心；有机层用乙酸钠溶液进行反萃和离心；加入pH调节剂调节乙酸钠溶液反萃液的pH，加乙酸乙酯进行涡旋和离心，取有机层氮吹浓缩至干，加水复溶并进行涡旋，过滤膜后，采用HLPC‑MS/MS测定。本发明的有益效果为：该方法能够避免高氯酸的加入所引起的沉淀包裹氯霉素而导致氯霉素难以提取出来的情况发生，进一步提高方法的灵敏度。

技术领域

本发明涉及检测方法，特别涉及一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法。

背景技术

氯霉素是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素，属抑菌性广谱抗生素。由于其对血液系统的毒性较大，被欧盟、日本、美国等国禁止用于动物源性食品。液相色谱-串联质谱法作为确证方法已经广泛被国内外政府监督检验机构运用，其在灵敏度、准确度、检测效率上所具有的独特优势，已成为目前最优越性的残留检测仪器设备。在检测动物源性食品的氯霉素残留量时，液相色谱-串联质谱法的检测限可以达到0.1μg/kg。但是，在运用液相色谱-串联质谱法检测蜂胶中的氯霉素残留量时，蜂胶中的成分有近千种，其检测限远达不到0.1μg/kg。

公开号为CN101865886A的中国专利公开了一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法。该方法通过加入氢氧化钠溶液溶解蜂胶样品，用水稀释以释出蜂胶样品中的目标物，再用高氯酸进行酸化以沉淀蜂胶样品中的蜂胶成分，蜂胶样液用氢氧化钠溶液将滤液的pH值调节到10.5，再使用乙酸乙酯对蜂胶样品中的氯霉素进行提取。

但是，高氯酸的加入所产生的沉淀会包裹氯霉素，从而难以提取出来，有待改进。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效液相色谱串联质谱测蜂王浆中氯霉素残留的方法。该方法能够避免高氯酸的加入所引起的沉淀包裹氯霉素而导致氯霉素难以提取出来的情况发生，进一步提高方法的灵敏度。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法，包括标准溶液制备工序、标准曲线制作工序、蜂胶样液制备工序和氯霉素残留量检测工序，蜂胶样液制备工序包括如下步骤：

取蜂胶样品和D5-氯霉素标准品内标充分混合，然后静置，再加入有机溶剂进行涡旋，使蜂胶样品充分溶解；

然后加入氢氧化碱溶液进行涡旋和离心，其中有机溶剂在上层，氢氧化碱溶液在下层；

往有机层加入乙酸钠溶液进行反萃和离心，再往有机层加入乙酸钠溶液进行反萃和离心，合并两次乙酸钠溶液反萃液；

加入pH调节剂调节乙酸钠溶液反萃液的pH，加乙酸乙酯进行涡旋和离心，取有机层氮吹浓缩至干，加水复溶并进行涡旋，过滤膜后，采用HLPC-MS/MS测定。

通过采用上述技术方案，蜂胶的主要成分为黄酮类化合物，利用有机溶剂溶解蜂胶，蜂胶中的黄酮类化合物用氢氧化碱溶液进行沉淀。由于有机溶剂的密度小于氢氧化碱溶液且不互溶，因此有机溶剂位于上层，氢氧化碱溶液位于下层。黄酮类化合物在有机层和无机层界面形成沉淀后下沉，而氯霉素会进入有机层，从而避免在氯霉素于有机层中形成沉淀的过程中氯霉素被沉淀包裹，从而促进氯霉素被提取，进而提高方法的灵敏度。

本发明进一步设置为：在首次加入乙酸钠溶液进行反萃和离心前加入正己烷。

通过采用上述技术方案，正己烷的加入能够降低氯霉素在有机溶剂中的溶解度，使氯霉素更容易被乙酸钠溶液进行反萃。

本发明进一步设置为：按照体积比，有机溶剂∶正己烷＝1∶1。