[发明专利]一种海带内生真菌及其在制备生物活性提取物方面的应用

说明书

本发明涉及一种海带内生真菌及其在制备生物活性提取物方面的应用，所述海带内生真菌的菌种保藏信息为：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2018年1月2日；保藏编号：CGMCC No.15181；分类命名：链格孢Alternaria sp.。

技术领域

本发明属于海洋微生物领域，具体涉及一种海带内生真菌及其在制备生物活性提取物方面的应用。

背景技术

阿尔茨海默病(AD)，即老年痴呆，是一种大脑神经系统慢性退行性疾病。其主要临床表现为记忆力逐渐衰退、认知功能发生障碍、表情淡漠、计算能力障碍、行为异常和社交障碍等。老年痴呆病导致老年人精神残疾，已然成为一个严重的社会问题。目前研究表明，导致阿尔茨海默病的病因颇多，主要有胆碱能缺失学说、氧化应激学说、基因突变学说、炎症因子学说等。“胆碱能缺失学说”主张大脑中枢胆碱能神经递质与记忆和认知功能相关，胆碱能神经递质——乙酰胆碱在AD患者的大脑中缺失，乙酰胆碱酯酶活性增强。目前为止临床上使用最广泛的药物，主要为单靶向的乙酰胆碱酯酶抑制剂，如他克林、多奈哌齐、卡巴拉汀等，但疗效不是很理想且多数价格昂贵。因此寻找来源广泛、高效的多靶向的抗老年痴呆药物迫在眉睫。

海带，别名江白菜、昆布，是一种生长在海底岩石的澡类。内生真菌生长繁殖时间短，可通过发酵进行大规模生产，因此研究内生真菌及其代谢产物，从中寻找天然活性物质，不仅前景广阔，而且具有很大的可行性。发明人先前发现青岛海域来源的海带内生真菌ML-X的发酵提取物对乙酰胆碱酯酶显示一定的抑制活性，并对其发酵条件进行优化，但其对乙酰胆碱酯酶的抑制活性仅为28.91％±0.25％。本发明克服现有技术缺陷，从威海海域来源的海带内生真菌W-1的发酵物中获得一种同时具有乙酰胆碱酯酶抑制及抗氧化活性的提取物。

发明内容

本发明提供一种海洋真菌Alternaria sp.W-1，该真菌为海带内生真菌，其中海带采集自威海海域。本发明所述海洋真菌Alternaria sp.W-1的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2018年1月2日；保藏编号：CGMCCNo.15181；分类命名：链格孢属Alternaria sp.W-1。

本发明的另一实施方案提供一种提取物，其特征在于该提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)在无菌条件下，将海洋真菌Alternaria sp.W-1接种到PD液体培养基中，恒温摇床振荡培养，温度为25-30℃，摇床转速为150-180r/min，培养时间为2-4d，得种子液；

(2)将步骤(1)得到的种子液接种到察氏培养基中，培养基pH为4.0-8.0，接种量为5-20％，培养温度为22-34℃，培养时间为6-14d，得发酵物；

(3)将步骤(2)得到的发酵物用3-5层无菌纱布过滤，得滤液，经旋转蒸发仪浓缩后，用乙酸乙酯萃取2-4次，合并有机相，经旋转蒸发仪浓缩即得所述提取物。

步骤(1)中温度优选为28℃，转速优选为160r/min，培养时间优选为3d；

步骤(2)中pH优选为6.0-7.0，接种量优选为10-15％；培养温度优选为28℃；培养时间优选8-10d；

步骤(3)中发酵物优选用4层无菌纱布过滤，乙酸乙酯萃取优选3次。

本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述提取物作为有效成分。该药物组合物还可包括适量的药学上可接受的药用辅料(例如药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂)。该药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

本发明的另一实施方案提供上述提取物在制备抗老年痴呆药物中的应用。