[发明专利]一种丁酸梭菌高密度连续发酵的方法及丁酸梭菌微生态制剂的制备方法

权利要求书

1.一种丁酸梭菌的高密度连续发酵方法，包括如下步骤：

将发酵罐串联，接入发酵培养基，通入保护气体；

在一级发酵罐中接种丁酸梭菌种子液进行连续发酵培养；当所述一级发酵罐中残糖浓度低于一级设定值时，以每小时5～10％发酵罐体积的速度放出发酵液到二级发酵罐中，同时一级发酵罐补充相应体积的发酵培养基，维持残糖浓度在一级设定值范围内；

当二级发酵罐中装液量体积达到70～80％罐体积时，监测残糖浓度，当残糖浓度小于二级设定值时，以每小时5～10％发酵罐体积的速度释放发酵液到三级发酵罐，同时二级发酵罐补充相应体积的补料培养基，维持残糖浓度在二级设定值范围内；

按照二级发酵罐的方法依次调节下一级发酵罐的残糖浓度，当最后一级发酵罐中残糖浓度在15％以下时，放出发酵液即为丁酸梭菌菌液；

所述一级发酵罐中的初始糖浓度为50～150g/L；

当发酵罐数量为3个时，各级发酵罐内的糖浓度为：一级设定值：90％～80％残糖；二级设定值：60％～45％残糖；三级设定值：15％～0％残糖；

当发酵罐个数为4个时，各级发酵罐内的糖浓度为：一级设定值：95％～85％残糖；二级设定值：70％～55％残糖；三级设定值：40％～25％残糖；四级设定值：15％～0％残糖；

当发酵罐数量为5个时，各级发酵罐内的糖浓度为：一级设定值：95％～85％残糖；二级设定值：75％～60％残糖；三级设定值：55％～40％残糖；四级设定值：35％～20％残糖；五级设定值：15％～0％。

2.根据权利要求1所述的高密度连续发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基包括：8～25g/L蛋白胨和/或酵母粉，30～80g/L甘蔗蜜糖、甜菜蜜糖和木质纤维素水解糖浆中的至少一种，0.1～0.2g/L MgSO₄，2～4g/L K₂HPO₄，1～2g/L KH₂PO₄，1～2mg/L MnSO₄。

3.根据权利要求1所述的高密度连续发酵方法，其特征在于，所述补料培养基包括：30～80g/L甘蔗蜜糖、甜菜蜜糖和木质纤维素水解糖浆中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的高密度连续发酵方法，其特征在于，所述连续发酵培养的温度为30～40℃，pH值为6.0～7.5，搅拌速率为100～200rpm。

5.一种连续发酵生产高密度丁酸梭菌微生态制剂的方法，其特征在于，包括：

采用权利要求1~4任意一项所述的方法进行发酵，将制备得到的丁酸梭菌菌液在2～20℃的条件下静止产孢，得到产孢丁酸梭菌菌液；

将所述产孢丁酸梭菌菌液与载体混合后，在40～50℃下进行真空干燥，得到丁酸梭菌微生态制剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述载体为蒙脱石粉和/或硅藻土，所述产孢丁酸梭菌菌液与载体的质量比为1:0.5～5。