[发明专利]一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽

说明书

本发明涉及乳腺癌病的生物防治技术领域，且公开了一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，包括多肽1，多肽1的序列为：H‑Ile‑Phe‑D‑Trp‑Leu‑Leu‑Trp‑Gln‑Gly‑Arg‑Gly‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Arg‑Arg‑Arg‑Arg‑Arg‑OH，一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽检测方法，包括以下步骤：1）乳腺癌细胞培养：选取乳腺癌细胞MDA‑MB‑231，并将乳腺癌细胞MDA‑MB‑231采用DMEM培养基培养，培上述养基中依次添加10%胎牛血清、100单位/毫升青霉素和100g/mL的链霉素。该靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，利用多肽1包裹siRNA形成纳米粒子来靶向递送siRNA到乳腺癌细胞，纳米粒子不仅能够通过乳腺癌细胞表面受体靶向递送siRNA，并且对正常细胞损坏小，提高了多肽1的实用性，同时利用多肽1靶向递送TRPC1 siRNA引起乳腺癌细胞的凋亡，从而达到治疗乳腺癌的效果。

技术领域

本发明涉及乳腺癌病的生物防治技术领域，具体为一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽。

背景技术

目前，乳腺癌的治疗包括五大块：分别是手术治疗、化疗、内分泌治疗、放疗和分子靶向治疗。分子生物学的发展和对发病机制从细胞、分子水平的深入认识，使得肿瘤治疗进入了一个新的分子靶向治疗的时代。与化疗、放疗相比，分子靶向治疗高效、选择性地杀伤肿瘤细胞，使得治疗更有针对性且副作用小。

目前，靶向递送siRNA到特定的细胞在药物研发领域有很大的潜力，siRNA不仅可以作为一个研究工具来抑制靶基因的表达，同时也可作为一种治疗方法治疗各种疾病。然而将siRNA靶向递送至乳腺癌细胞非常麻烦，现有的物质在靶向递送siRNA时，往往容易对正常细胞造成破坏，影响该技术的实用性，为此，我们设计了一种靶向肽。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，解决了现有的靶向递送siRNA不方便和容易对正常细胞造成破坏的问题。

（二）技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽，包括多肽1，所述多肽1的序列为：

H-Ile-Phe-D-Trp-Leu-Leu-Trp-Gln-Gly-Arg-Gly-Gly-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-OH。

一种靶向导入siRNA促进乳腺癌细胞凋亡的多肽检测方法，包括以下步骤：

1）乳腺癌细胞培养：选取乳腺癌细胞MDA-MB-231，并将乳腺癌细胞MDA-MB-231采用DMEM培养基培养，培上述养基中依次添加10%胎牛血清、100单位/毫升青霉素和100g/mL的链霉素，制备乳腺癌细胞培养溶液，控制温度为37℃，将上述溶液放置在浓度为5%的二氧化碳培养箱中培养24-72小时。

2）多肽1/siRNA结合能力测试：用不同浓度比的多肽1分别与siRNA进行凝胶阻滞分析测试，制备复合物，并且用肝素（去聚阴离子复合物稳定剂）作用于上述复合物，观察结果，并进行记录。

3）多肽1/siRNA复合物稳定性试验：取步骤2）中制备的多肽1/siRNA复合物，将上述复合物内添加RNA核酸酶，并将上述复合物与RNA核酸酶形成的混合物放置在小鼠血清孵育环境下，对多肽1/siRNA复合物在RNA核酸酶和小鼠血清孵育环境下的稳定性进行检测，同时用肝素释放siRNA后用凝胶阻滞分析测试siRNA的稳定性，对测试结果进行记录。

4）乳腺癌细胞凋亡实验研究：通过Westernblo检测用多肽1/siRNA复合物转染后凋亡指标bax的条带变化，并与对照组进行比较，观察多肽1/siRNA复合物的优劣势，进行记录。