[发明专利]一种小而密低密度脂蛋白胆固醇试剂盒

说明书

本发明公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，由两个独立的试剂R1及试剂R2组成，R1含缓冲液、脂蛋白脂肪酶、非离子表面活性剂、血清白蛋白、肝素钠、镁离子、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶或过氧化物酶、Trinder’s反应剂A、稳定剂、防腐剂；R2含缓冲液、非离子表面活性剂、Trinder’s反应剂B、叠氮钠、防腐剂。以试剂R1先与标本混合消除SD‑LDLC以外之胆固醇，在试剂R2加入后针对SD‑LDLC反应，Trinder’s反应剂B呈色测定吸光度，计算其含量。本发明试剂盒稳定性好，准确度高，操作简单快速，适用于全自动生化分析仪检测。

技术领域

本发明涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇试剂盒。

背景技术

《中国心血管病报告2016》指出，我国心血管病患人数约2.9亿人，占居民死亡率之40％以上，而血液中胆固醇量太高，尤其是不好胆固醇---低密度脂蛋白胆固醇(LowDensity Lipoprotein Cholesterol，简称LDLC)过高是造成心血管病之主要原因之一。

血液中除少量游离胆固醇外，大部份胆固醇均与其相应之蛋白质结合形成颗粒体积不同、密度不同之脂蛋白胆固醇，临床检验上常用超速离心分类为乳糜粒(Chylomicron,简称CM，颗粒大小80～500nm，密度＜0.95g/L)，极低密度脂蛋白(Very Low DensityLipoprotein,简称VLDL，颗粒大小30～80nm，密度0.95～1.006g/L)胆固醇，低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein，简称LDL，颗粒大小19～30nm，密度1.019～1.063g/L)胆固醇，及高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein，简称HDL，颗粒大小7～10nm，密度1.063～1.21g/L) 胆固醇；其中HDL可将动脉壁中之胆固醇转运至肝脏代谢分解以减少胆固醇在血管壁的沉积，起到抗动脉粥样硬化与保护血管的作用，与之相反的，LDL则将血液中之胆固醇转运至血管壁细胞内沉积导致动脉粥样化发生，是心血管疾病之高危险因子。

每一分子之LDL含一个载脂蛋白B(APOB)及其连接之胆固醇、磷脂等组成，将纯化之LDL进一步超速离心可将其分开成两部分，颗粒较大、密度较轻 (1.019～1.044g/L)的称轻(大)低密度脂蛋白(Light或Large LDL, 简称L-LDL)及体积较小，密度较大(1.044～1.063g/L)的称小而密低密度脂蛋白(Small Dense Low Density Lipoprotein，简称SD-LDL)， SD-LDL由于颗粒小，容易渗入动脉血管壁，其较低之LDL受体(LDL Receptor)亲和力，不易被代谢，在血液中有更长的半衰期，其抗氧化能力比L-LDL低，其心血管病之致病性比L-LDL高3.5倍以上；因SD-LDL是由富含甘油三酯之VLDL(简称VLDL1)代谢产生，而VLDL1在肝脏合成时受到胰岛素抗性(Insulin resistance)之刺激，尤其是2型糖尿病病人其胰岛素抗性之增加导致了SD-LDL之增加，所以SD-LDL除了心血管病之良好指标外，亦是2型糖尿病之重要诊断因子。

此外，Lamarche等人追踪2013正常人(59±7岁)缺血性心脏病(IHD)之发生率发现SD-LDL高的五年后，IHD之发病率高出3.6～ 5.1倍，因此SD-LDL将成为临床诊断之重要项目。

SD-LDL测定常用梯度凝胶电泳(Gradient gel electrophoresis),质子核磁共振(Proton NMR spectroscopy)，梯度超速离心(Density gradient ultracentrifugation)，高压液相(HPLC)等来测定，但设备昂贵，操作复杂，不适于常规检验测定用，虽Hirano等人发明以比浊法试剂可用全自动生化分析仪来测定，但标本须先处理，将SD-LDL以外之脂蛋白离心沉淀后，再将上清液以比浊法测定，操作麻烦，特异性及准确度不高。

发明内容