[发明专利]乳酸菌源共轭亚麻酸高效液相制备方法

说明书

本发明公开了乳酸菌源共轭亚麻酸高效液相制备方法，属于微生物技术领域。本发明提供了一种乳酸菌源共轭亚麻酸高效液相制备方法，采用配备XB‑C30(4.6×250mm，5μm)高效液相色谱柱的HPLC进行分离，所述分离是以甲醇‑水‑甲酸溶液为流动相，流速为1mL/min，柱温为37℃，检测波长为205nm和233nm。应用本发明的方法对共轭亚麻酸进行分离，峰形良好，分离度好，检测结果准确；采用本发明的方法制备的乳酸菌源CLNA的保留时间的RSD范围为0.05％‑0.38％，峰面积的RSD范围为1.88％‑4.65％，纯度最高可达到100.00％。

技术领域

本发明涉及乳酸菌源共轭亚麻酸高效液相制备方法，属于微生物技术领域。

背景技术

共轭脂肪酸是指含有共轭双键的多不饱和脂肪酸的位置和几何异构体的总称。共轭亚麻酸(CLNA)是一组在碳8,10,12；9,11,13；10,12,14；11,13,15不同位置、不同构型(ttt,ctt,ctc, ccc,tct,ttc等)的十八碳三烯酸的位置和几何异构体，具有抗癌、抗炎症、抗氧化、抗心血管疾病、减肥等生理功能，并且相较于其它共轭脂肪酸，CLNA的生理作用更明显，同时共轭三烯脂肪酸有利于聚合和黏贴，在工业上可以作为有机涂料聚合物。天然CLNA主要来源于植物种子，极少量来源于动物。目前，天然CLNA的分离提纯方法主要有尿素包合法、超临界CO₂流体萃取法等，将饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸进行分离，产物多为结构差异很小的混合物，并且收率低，成本高；工业制备CLNA的方法主要包括化学合成法、脱水法、碱异构法等，产物多为混合物，制备过程中有机试剂可能有残余，而且能耗大，效率低，污染环境。许多微生物(如瘤胃细菌、丙酸杆菌、乳酸菌等)可产CLNA，其异构体单一，多为9,11,15 位置的十八碳三烯脂肪酸。其中，瘤胃细菌(如溶纤维丁酸弧菌)是严格厌氧细菌，丙酸杆菌是致病菌，均不能满足工业大规模生产的需要；相比较下，乳酸菌是兼性厌氧细菌，且近几年来作为益生菌得到了大众的普遍认可，故本实验选择乳酸菌作为CLNA的代谢菌种。 CLNA的功能与其异构体的种类有关，而乳酸菌所产的CLNA与植物来源、化学合成的CLNA 结构有所不同，因此乳酸菌发酵液中不同CLNA异构体之间的分离显得尤为重要，又由于 CLNA异构体的结构差异极小，分离制备的方法成为了制约CLNA异构体研究的一大难题。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种分离共轭亚麻酸的方法，所述方法是采用配备填料为球形硅胶基质色谱填料的高效液相色谱柱的HPLC进行分离；所述分离是以甲醇-水溶液为流动相，流速为1mL/min。

在本发明的一种实施方式中，所述色谱柱为高效液相色谱柱XB-C30(4.6×250 mm，5μm)，购自月旭科技(上海)股份有限公司。

在本发明的一种实施方式中，所述甲醇-水溶液中含有甲酸。

在本发明的一种实施方式中，所述流动相为体积比60～70∶30～40∶0.001～0.005的甲醇- 水-甲酸。

在本发明的一种实施方式中，所述流动相为体积比70∶30∶0.001的甲醇-水-甲酸。

在本发明的一种实施方式中，所述共轭亚麻酸为乳酸菌来源的共轭亚麻酸。

在本发明的一种实施方式中，所述共轭亚麻酸为植物乳杆菌来源的共轭亚麻酸。

在本发明的一种实施方式中，所述共轭亚麻酸包括但不限于CLNA1、CLNA2、CLNA3；所述CLNA1、CLNA2、CLNA3为共轭亚麻酸的同分异构体，在质谱上的m/z值分别为277.22、279.22；277.22、279.22；253.22、277.22。

在本发明的一种实施方式中，检测波长为205nm和233nm。

在本发明的一种实施方式中，流速为1mL/min，柱温为35～37℃。