[发明专利]一种活化部分凝血活酶时间检测试剂及检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种活化部分凝血活酶时间检测试剂及检测方法。该检测试剂由激活剂、磷脂、二价金属离子盐、缓冲剂、表面活性剂、抗氧化剂和稳定剂组成，该试剂能够对APTT进行准确、快速检测，且稳定性良好。37℃保存15天仍然稳定，检测效果未受影响。与未添加表面活性剂的对照组相比，本发明的检测试剂对低纤维蛋白原含量的样品也能实现准确检测，降低了检测限提高了灵敏度，且对各种样品的检测皆显示出了良好的精密度，cv值小于3％。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种活化部分凝血活酶时间检测试剂及检测方法。

背景技术

活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplatin time,APTT)是检查内源性凝血因子的一种过筛试验，可用来证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ的缺陷或是否存在它们相应的抑制物。同时，APTT也可用来证实凝血因子Ⅻ、激肽释放酶原和高分子量激肽释放酶原是否缺乏。由于APTT的高度敏感性和肝素的作用途径主要是内源性凝血途径，所以APTT成为监测普通肝素首选指标。

活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂主要由激活剂、磷脂、钙离子三部分组成，测试时先将激活剂与血浆混合后37℃育温一段时间，然后加入钙离子激活内源性凝血系统，测定纤维蛋白凝块形成的时间。

目前，APTT测定的激活剂主要有高岭土、硅藻土等，天然矿物材料，但是其试剂通常以混悬液的状态存在，试剂的均匀性难以保证，如果出现沉淀则直接影响测试的准确性。且目前国内大多APTT试剂为冻干粉制剂形式，使用前需对试剂进行复溶，操作比较麻烦，且容易因复溶液体积不准等造成测定结果出现误差。鞣花酸作为一种常见的激活剂，也广泛用于活化部分凝血活酶时间测定试剂的制备中，相较于高岭土、硅藻土等激活剂，鞣花酸在水中溶解性较好，易制成液体状试剂，但鞣花酸本身是一种多酚化合物，容易被氧化，所以容易造成凝固时间延长。且许多市售试剂在测试纤维蛋白原含量很低的样本时，容易因为反应强度过低而不能准确读出凝固时间。因此，如何提高APTT检测试剂的稳定性，仍是亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种活化部分凝血活酶时间检测试剂及检测方法，本发明提供的试剂稳定性良好，能够实现对APTT准确、快速、灵敏的检测，检测结果具有良好的精密度。

本发明提供的活化部分凝血活酶时间的检测试剂，由激活剂、磷脂、二价金属离子盐、缓冲剂、表面活性剂、抗氧化剂和稳定剂组成；

所述激活剂为鞣花酸；

所述磷脂为脑磷脂；

所述二价金属离子盐中的金属离子为Cu²⁺、Ni²⁺、Mn²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺中的一种或几种；

所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷缓冲液(Tris-HCl)、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液(Pipes)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(Hepes)、3-((N-吗啉)丙磺酸缓冲液(Mops)中的任一种；

所述表面活性剂为聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、曲拉通(TX-100)、吐温系列中的一种或几种；

所述抗氧化剂为苯酚、4-羟基苯酚、丁基羟基茴香醚(BHA)、没食子酸丙酯(PG)、绿原酸、抗坏血酸(VC)中的一种或几种；

所述稳定剂由甘氨酸、甘露醇、BSA和叠氮化钠组成。

本发明实施例中，检测试剂中鞣花酸的浓度为0.01g/L～0.05g/L。

一些实施例中，检测试剂中鞣花酸的浓度为0.03g/L；